GBT28070-2011黑麥草腥黑粉菌檢疫鑒定方法.pdf

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1、ICS65．020．01B16園國中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB／T28070--2011黑麥草腥黑粉茵檢疫鑒定方法DetectionandidentificationofTilletiawalkeriCastlebury&Carris2011—12—30發(fā)布2012-06-01實(shí)施宰瞀鵲紫瓣警糌瞥翼發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)促111標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費(fèi)下載刖罱GB／T28070--201本標(biāo)準(zhǔn)按照GB／T1，1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC／TC271>提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國深圳出入境檢

2、驗(yàn)檢疫局，深圳市檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：章桂明、程穎慧、王穎、陸清、凌杏元、龍海、陳枝楠、劉新嬌、仲建忠、楊偉東、繆建錕。標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費(fèi)下載1范圍黑麥草腥黑粉菌檢疫鑒定方法GB／T28070--2011本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了黑麥草腥黑粉菌的檢疫鑒定方法和檢疫鑒定流程，明確了取樣和樣品保存方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于黑麥草傳帶黑麥草腥黑粉菌的檢測以及小麥中污染的黑麥草腥黑粉菌的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文

3、件。GB／T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB／T18085植物檢疫小麥矮化腥黑穗病菌檢疫鑒定方法GB／T19495．2轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求SN／T2122進(jìn)出境植物及植物產(chǎn)品檢疫抽樣3黑麥草腥黑粉菌基本信息中文名：黑麥草腥黑粉菌。學(xué)名：T／lletiawalkeriCastlebury&Carris(簡稱Tw)。英文名：ryegrassbunt。屬真菌界Fungi、擔(dān)子菌門Basidiomycota、黑粉菌綱Ustomycetes、黑粉菌目Ustilaginales、腥黑粉菌科Tilletiaeeae、腥黑粉菌屬Tilletia。病粒及附著于健康種子

4、表面的冬孢子是病原菌進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播的主要途徑，由于該病局部侵染的特性，在收獲期間很難有效的清除混雜于健康種子中的病粒，因而病?？呻S同小麥或黑麥草的資源性引種或科研性引種而進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播。黑麥草腥黑粉菌的其他信息參見附錄A。4方法原理根據(jù)黑麥草腥黑粉菌的生物學(xué)和形態(tài)學(xué)特征以及分子生物學(xué)特征，應(yīng)用相關(guān)儀器，包括顯微鏡和PCR儀等對小麥印度腥黑穗病菌進(jìn)行鑒定。5檢疫鑒定流程檢疫鑒定流程見圖1。標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費(fèi)下載GB／T28070--20116取樣方法2圖1黑麥草腥黑粉病菌檢疫鑒定流程圖散裝船運(yùn)黑麥草種子及小麥參照GB／T18085取樣方法進(jìn)行取樣

5、。袋裝黑麥草及小麥參照SN／T2122取樣方法進(jìn)行取樣。標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費(fèi)下載7主要儀器設(shè)備和試劑7．1主要儀器設(shè)備1搖床。2顯微鏡。3純水器。4測序儀。5電泳儀。6低溫冰箱。7顯微操作儀。8超凈工作臺(tái)。9高壓滅菌鍋。10光照培養(yǎng)箱。11旋渦振蕩器。12普通離心機(jī)。13冷凍干燥機(jī)。14凝膠成像儀。15核酸蛋白分析儀。16PCR儀(常規(guī)PCR儀、實(shí)時(shí)熒光PCR儀)。17破壁針(具有平截切面的針，能將孢子壓碎)。18培養(yǎng)皿(9cm)。19篩網(wǎng)(40／zm、20pm)。20孔徑100pm的毛細(xì)管。21錐形瓶(250mL、500mL)。22蓋玻片(18

6、mm×18mm)。23PCR反應(yīng)管(0．2mL，0．5mL)。24載玻片(25mmX76mm)，厚(o．8mm～1．0mm)。25Tip頭(0．1／tL～10弘L，5pL～200pL，100pL～1000／zL)。26可調(diào)微量移液器(2pL，10pL，20弘L，100pL，200pL，1000pL)7．2主要試劑除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純或生化試劑。7．2．1三氯甲烷。7．2．2異戊醇。7．2．3異丙醇。7．2．4醋酸鈉。7．2．5甲酰胺。7．2．670％乙醇。7．2．7無水乙醇。7．2．8Tris飽和酚。7．2．9Taq酶。GB／T28070--20137標(biāo)

7、準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費(fèi)下載(；B／T28070--2017．2．107．2．117．2．127．2．137．2．147．2．157．2．167．2．177．2．187．2．197．2．207．2．21Gelatin。溴化乙錠。DNAMarker。PDA培養(yǎng)基。SDS提取液。PeR緩沖液。電泳緩沖液。上樣緩沖液。Bigdye試劑盒。TaqManUniversalPCRMasterMix。席爾氏浮載劑，見GB／T18085。dNTPs(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)。8檢測與鑒定8．1實(shí)驗(yàn)室器皿和曬網(wǎng)前處理將所有實(shí)驗(yàn)器皿和篩網(wǎng)浸泡于1．69