hh信號(hào)通路論文：hedgehog信號(hào)通路在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制探討

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1、Hh信號(hào)通路論文：Hedgehog信號(hào)通路在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制探討【中文摘要】胃癌是全世界發(fā)病率和死亡率均非常高的惡性腫瘤,全球近半數(shù)胃癌發(fā)生在我國(guó),并且近年來發(fā)病呈年輕化的趨勢(shì)。目前胃癌的總體治療效果仍然非常差,其發(fā)病機(jī)制尚不清楚,也缺乏特異性治療藥物。國(guó)內(nèi)外研究表明針對(duì)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的某些分子靶點(diǎn)研制靶向治療藥物是提高惡性腫瘤整體療效的重要措施之一。Hedgehog(Hh)信號(hào)通路在胚胎發(fā)育、維持細(xì)胞增殖與凋亡動(dòng)態(tài)平衡、組織損傷與修復(fù)以及多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。研究表明SonicHedgehog(SHH)信號(hào)通路的異常激活可能與胃癌有關(guān),但其具

2、體的分子機(jī)制目前尚不清楚,且在慢性淺表性胃炎→萎縮性胃炎→腸上皮化生→異型增生→胃癌這一經(jīng)典的胃粘膜癌變過程中的表形也未見系統(tǒng)的研究報(bào)道。為此,本課題旨在通過臨床病理標(biāo)本及體外研究探討Hh信號(hào)通路在胃粘膜癌變過程中的變化規(guī)律及其可能的分子作用機(jī)制,為胃癌分子靶向治療研究提供新思路。研究1、研究Hh信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子：Shh、Smo、SuFu、Glil、Gli2和Gli3以及細(xì)胞周期調(diào)控蛋白CyclinD1在慢性淺表性胃炎→萎縮性胃炎→腸上皮化生→異型增生→胃癌這一胃粘膜癌變過程中的表達(dá)特征,探討其臨床意義。2、研究Hh信號(hào)通路與CyclinD1的表達(dá)、胃粘膜上皮細(xì)胞增殖、

3、凋亡及胃癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,探討Hh信號(hào)通路在胃癌發(fā)生發(fā)展中的分子作用機(jī)制。3、研究Hh信號(hào)通路阻斷劑Cyclopamine對(duì)胃癌細(xì)胞增殖及Glil、CyclinD1蛋白表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討Hh信號(hào)通路在胃癌中的作用機(jī)制。研究方法：一、臨床病理標(biāo)本研究部分選取南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院2007年1月至2009年9月胃鏡活檢或外科手術(shù)病理標(biāo)本共186例,其中慢性淺表性胃炎(Chronicsuperficialgastritis,CSG)44例,萎縮性胃炎(化生性萎縮性胃炎,Metaphasticatrophygastritis,MAG)44例,異型增生(Dysplasia,

4、Dys)48例,胃癌(Gastriccancer,GC)50例為研究對(duì)象,同時(shí)收集臨床病理資料。通過HE染色確定病理診斷,采用免疫組織化學(xué)二步法檢測(cè)Hh信號(hào)通路中的關(guān)鍵因子：Shh、Smo、SuFu、Gli1、Gli2和Gli3以及細(xì)胞周期調(diào)控蛋白CyclinD1的表達(dá),同時(shí)檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原PCNA的表達(dá)。采用脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記(TUNEL)技術(shù)研究細(xì)胞調(diào)亡。二、體外研究部分通過不同濃度的Cyclopamine作用于胃癌細(xì)胞MKN28不同時(shí)間(24h、48h及72h),用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),四唑藍(lán)(MTT)比色試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率,蛋白印跡(

5、WesternBlot,WB)方法檢測(cè)阻斷Hh信號(hào)通路后對(duì)Gli1及CyclinD1蛋白表達(dá)的影響。研究結(jié)果：一、臨床病理標(biāo)本研究部分(1)Shh在Dys組表達(dá)最高,MAG組最低：MAG組顯著低于CSG組(P=0.0030.05),但顯著低于MAG組及Dys組(P0.05)；細(xì)胞核染色陽(yáng)性率GC組(32.00%)顯著高于CSG組(4.55%)、MAG組(6.82%)及Dys組(8.33%)。Glil的表達(dá)與胃癌分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P0.05)。(6)GC組Gli3的表達(dá)顯著低于其他3組(P0.05)；(8)PCNA在GC組表達(dá)顯著高于CSG及

6、MAG組(P0.05)；(9)細(xì)胞凋亡指數(shù)GC組(4.08±1.41)及Dys組(6.14±1.56)均顯著低于CSG組(12.54±4.23)及MAG組(21.37±6.27)(P<0.01)。(10)在胃粘膜癌變過程中Gli1的表達(dá)與CyclinD1的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(R=0.214,P=0.003<0.01);與PCNA的表達(dá)也呈正相關(guān)(R=0.145,P=0.048<0.05)；與細(xì)胞凋亡呈顯著負(fù)相關(guān)性(R=0.278,P=0.002<0.01)。二、體外研究部分(1)Cyclopamine阻斷Hh信號(hào)通路后,胃癌細(xì)胞MKN28出現(xiàn)類似凋亡樣的形態(tài)改變,增殖受到顯著

7、抑制,并呈濃度及時(shí)間依賴性。(4)阻斷Hh信號(hào)通路后,顯著下調(diào)CyclinD1的表達(dá),Gli1表達(dá)總量卻未見明顯下調(diào)。結(jié)論：1、胃粘膜癌變過程中Hh信號(hào)通路發(fā)生異?；罨?。2、Hh信號(hào)通路的異?；罨c胃癌分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。3、阻斷Hh信號(hào)通路可下調(diào)CyclinD1的表達(dá),抑制MKN28細(xì)胞增殖?！居⑽恼緽ackground:Gastriccancerisapublichealthyprobleminthewholeworldwithhighincidenceandmortalit