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《丙泊酚血藥濃度測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、分子式：C12H18O。分子量：178.274血漿丙泊酚濃度高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定方法色譜條件色譜柱為KromasilC18(5μm,4.6mm×250mm,柱號(hào)：KR-002545)；柱壓：90～100kg·cm-1；柱溫：40℃，流動(dòng)相：乙腈-水（70:30）；流速：1ml·min-1；熒光激發(fā)波長(zhǎng)為276nm；發(fā)射波長(zhǎng)310nm；內(nèi)標(biāo)物：麝香草酚；定量方法：峰面積法。高效液相色譜法測(cè)定中血漿內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，內(nèi)標(biāo)麝香草酚與丙泊酚完全分離,內(nèi)標(biāo)麝香草酚的保留時(shí)間約為7.1min，丙泊酚保留時(shí)間約為11.1min。樣品分離色譜圖見(jiàn)圖1。2BA2DC211
2、圖1丙泊酚和麝香草酚的高效液相色譜圖A空白血漿B丙泊酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液C丙泊酚和麝香草酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液D樣品血漿1麝香草酚2丙泊酚丙泊酚標(biāo)準(zhǔn)溶液配制精密稱取丙泊酚對(duì)照品10mg,并加入100ml的量瓶中,-6-用乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻后即可得濃度為100mg·L-1的丙泊酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。精密量取丙泊酚對(duì)照品儲(chǔ)備液1ml，加至10ml量瓶中用乙腈稀釋至刻度,搖勻,配成濃度為10mg·L-1的丙泊酚對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)工作液。麝香草酚標(biāo)準(zhǔn)工作液配制精密稱取麝香草酚10mg,加入100ml的量瓶中,用乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻后即可得濃度為100mg·L-1的麝香草酚標(biāo)準(zhǔn)工作液。血藥濃度測(cè)定量
3、取待測(cè)的肝素抗凝血漿1ml加入試管中，并準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)物即100mg·L-1麝香草酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液100μl,再加入PH6.0、濃度為0.1mol.l-1的磷酸二氫鉀緩沖溶液100μl，搖勻混合后,加入5ml環(huán)己烷有機(jī)溶劑,立即漩渦混和3min。再在低溫離心機(jī)中3000r.min-1離心20min,靜置分層，取4ml上層液移至另一尖底試管中，在50℃下用N2吹干，用100μl流動(dòng)相溶解,取20μl進(jìn)樣分析。？乙腈-水（70:30）麝香草酚磷酸二氫鉀緩沖液PH6.0、濃度為0.1mol.l-1環(huán)己烷標(biāo)準(zhǔn)曲線制備取6支10ml具塞試管，并分別加入1ml空白血漿，再精密量取適量的丙
4、泊酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其血藥濃度分別相當(dāng)于0.04μg.ml-1，0.1μg.ml-1，0.25μg.ml-1，1μg.ml-1，5μg.ml-1，25μg.ml-1的6種濃度的含藥血漿（10mg·L-1：4μl、10.1μl、25.64μl、111.1μl、1000μl，100mg·L-1：333.3μl），取上述含藥血漿各1ml，按上述的血藥濃度測(cè)定方法進(jìn)行操作，以丙泊酚對(duì)內(nèi)表物的峰面積比（X）與丙泊酚的質(zhì)量濃度(μg.ml-1)的進(jìn)行線性回歸。得丙泊酚在0.04～25μg.ml-1濃度范圍內(nèi)線性回歸方程為Y=1.1679X-0.0025，相關(guān)系數(shù)r=0.9979，見(jiàn)圖2
5、圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性方程-6-回收率與精密度實(shí)驗(yàn)提取回收率在1ml空白人血漿中準(zhǔn)確加入適量的丙泊酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別配制成0.1μg.ml-1，1μg.ml-1和25μg.ml-1低、中、高3種質(zhì)量濃度的丙泊酚標(biāo)準(zhǔn)血樣（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100mg·L-1：333.3μl），經(jīng)萃取后再加內(nèi)標(biāo)，測(cè)定其峰高比R1，同法測(cè)定不經(jīng)萃取的標(biāo)準(zhǔn)丙泊酚溶液加內(nèi)標(biāo)的峰高R2，按R1/R2×100%計(jì)算提取回收率，結(jié)果見(jiàn)表1.表1血漿中丙泊酚提取回收率（，n=5）質(zhì)量濃度（μg.mL-1）回收率/%RSD/%0.199.15±2.382.401106.88±3.2
6、83.072598.28±4.494.58方法回收率同上述方法分別配制濃度也為0.1μg.mL-1，1μg.mL-1，25μg.mL-1三種濃度的丙泊酚標(biāo)準(zhǔn)血樣各5份（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100mg·L-1：333.3μl），按上述血藥濃度測(cè)定方法進(jìn)行操作，將測(cè)定的丙泊酚峰高與內(nèi)標(biāo)峰高比帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出測(cè)定藥物濃度，用測(cè)定濃度/實(shí)際濃度×100%公式求得方法回收率，見(jiàn)表2。表2測(cè)定方法回收率（，n=5）質(zhì)量濃度（μg.mL-1）回收率/%RSD/%0.1101.85±1.361.341101.16±1.642.1425100.01±1.74
7、1.74精密度實(shí)驗(yàn)同上述方法分別配制濃度為0.1，1，25μg.mL-1三種濃度的丙泊酚標(biāo)準(zhǔn)血樣各5份（10mg·L-1：10.1μl、111.1μl，100mg·L-1：333.3μl），按上述血藥濃度測(cè)定方法進(jìn)行操作。以上3種濃度的血漿樣品分別于同一日內(nèi)不同時(shí)間內(nèi)測(cè)定，共計(jì)5次，根據(jù)同一濃度的不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的數(shù)值，計(jì)算各質(zhì)量濃度的日內(nèi)變異系數(shù)，即為日內(nèi)精密度；另在連續(xù)5日每日測(cè)定一次丙泊酚-6-的質(zhì)量濃度，根據(jù)所測(cè)得濃度計(jì)算日間變異系數(shù)，即為日間精密度，低、中、高三種濃度日內(nèi)、日間變異均小于10%，表明該方法的精密度符合生物樣品的分析
