egr-1調(diào)控低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬對(duì)肝癌化療耐藥的作用及其機(jī)制

《egr-1調(diào)控低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬對(duì)肝癌化療耐藥的作用及其機(jī)制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。

1、@江篇犬爹碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題0:Egr-l調(diào)控低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬對(duì)肝癌化療耐藥的作用及其機(jī)制學(xué)科專業(yè)：生理學(xué)作者姓名：熊ニ夢(mèng)導(dǎo)師：襲愛華副教授指導(dǎo)教師：彭琬昕講師答辯日期：ニO—三年六月碩士學(xué)位論文Egr-1調(diào)控低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬對(duì)肝癌化療耐藥的作用及其機(jī)制Egr-lRegulatesHypoxia-inducedAutophagyinChemo-resistanceofhepatocellularCarcinomaCells作者姓名：熊ニ夢(mèng)導(dǎo)師：龔愛華副教授指導(dǎo)教師：彭琬昕講師申請(qǐng)學(xué)位：碩士學(xué)科

2、專業(yè)：生理學(xué)（腫瘤細(xì)胞生物學(xué))論文提交日期：2013年4月27日論文答辯日期：2013年06月09日學(xué)位授予單位：江蘇大學(xué)答辯委員會(huì)主席：陳永昌教授基金資助：國(guó)家自然科學(xué)基金();江蘇大學(xué)高級(jí)人才科研啟動(dòng)基金(10JDG045)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書江蘇大學(xué)、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所、國(guó)家圖書館、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致，允許論文被查閱和借閱，同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本論文編入《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)

3、據(jù)庫(kù)》井向社會(huì)提供查詢，授權(quán)中國(guó)學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社將本論文編入《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》井向社會(huì)提供查詢。論文的公布（包括刊登）授權(quán)江蘇大學(xué)研究生院辦理。保密口本學(xué)位論文屬于不保密0江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內(nèi)容以外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。曰期:年。月/f曰江蘇大學(xué)碩士學(xué)位

4、論文摘要目的：1、通過體外模擬低氧微環(huán)境，探討Egr-1在低氧誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞化療抵抗中的調(diào)控作用。2、探明肝癌細(xì)胞在低氧條件下Egr-1通過調(diào)控細(xì)胞自噬促進(jìn)肝癌細(xì)胞化療抵抗的分子機(jī)制，為應(yīng)用該基因提高肝癌化療效果提供理論基礎(chǔ)。方法：1、MTT法檢測(cè)肝癌HepG2和SMMC-7721細(xì)胞在常、低氧條件下對(duì)不同濃度化療藥（順鉑和多柔比星）的敏感性差別。2、在肝癌細(xì)胞中采用腺病毒DNEgr-1競(jìng)爭(zhēng)性抑制Egr-1的作用，用MTT法檢測(cè)肝癌細(xì)胞中Egr-1對(duì)低氧條件誘導(dǎo)的化療抵抗的影響。3、Westernblotting的方法檢測(cè)不同低氧培養(yǎng)時(shí)

5、間下肝癌HepG2和SMMC-7721細(xì)胞中Egr-1和自噬相關(guān)蛋白LC3及Beclin-1的表達(dá)情況。4、用腺病毒DNEgr_l或Egr-1抑制或過表達(dá)Egr-1，在常、低氧培養(yǎng)條件下，用qRT-PCR、Westernblotting和ChIP(染色質(zhì)免疫共沉淀)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子Egr-1對(duì)LC3表達(dá)的調(diào)控作用。5、在肝癌HepG2細(xì)胞中感染腺病毒DNEgr-1后低氧培養(yǎng)4h，用免疫熒光的方法檢測(cè)LC3的分布情況。結(jié)果：1、肝癌HepG2和SMMC-7721細(xì)胞感染腺病毒GFP或DNEgr-1后，以0、1,25、2.5、5和10_的順鈾或

6、以0、0.125、0.25、0.5和lug/ml的多柔比星處理細(xì)胞，然后分別常氧、低氧培養(yǎng)24h，結(jié)果顯示，兩個(gè)細(xì)胞系中低氧都明顯降低細(xì)胞對(duì)順鉑和多柔比星的敏感性，但化療藥物濃度過高或過低時(shí)，低氧對(duì)化療藥物細(xì)胞毒性的減少不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。然而，在HepG2和SMMC-7721細(xì)胞中表達(dá)DNEgr-1,化療藥物濃度相對(duì)較低時(shí)可以部分逆轉(zhuǎn)低氧誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞對(duì)順鉑和多柔比星敏感性的降低（/><0.05)。2、肝癌細(xì)江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文胞在低氧條件下培養(yǎng)不同時(shí)間。結(jié)果顯示，在HepG2細(xì)胞中Egr-1的本底表達(dá)水平很低，

7、但SMMC-7721細(xì)胞中基本沒有表達(dá)；在兩種細(xì)胞株中低氧處理〇.5h后表達(dá)水平都明顯升高并且在lh時(shí)表達(dá)水平達(dá)到最大值，在4h時(shí)出現(xiàn)降低。LC3的表達(dá)水平在低氧0.5h出現(xiàn)明顯升高，并在4h表達(dá)水平最高，Beclin-1的表達(dá)在兩種細(xì)胞系中低氧4h時(shí)明顯增高。3、肝癌細(xì)胞感染腺病毒DNEgr-1和GFP48h后再經(jīng)常氧或低氧處理4h，過表達(dá)DNEgr-1明顯抑制低氧誘導(dǎo)的LC3表達(dá)的增高，但在常氧條件下過表達(dá)Egr-1并不明顯增加LC3的量。ChIP結(jié)果表明，外源表達(dá)的Egr-1可與LC3的啟動(dòng)子結(jié)合，而感染GFP對(duì)照腺病毒的細(xì)胞由于

8、Egr-1的表達(dá)水平低，Egr-1的抗體并沒沉淀下LC3的啟動(dòng)子序列。在感染腺病毒GFP和DNEgr-1后低氧處理lh的實(shí)驗(yàn)組結(jié)果表明，低氧條件下Egr-1與LC3啟動(dòng)子結(jié)合，并且DNEgr-1可以抑制這種