木犀草素對(duì)急性肺損傷的干預(yù)和保護(hù)作用

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1、木犀草素對(duì)急性肺損傷的干預(yù)和保護(hù)作用　　急性肺損傷(acutelunginjury，ALI)是由多種原因引起的以肺泡毛細(xì)血管膜通透性增高為特征的肺損傷，是臨床重癥監(jiān)護(hù)患者主要的死亡原因，病死率達(dá)到30%～50%［1－3］。ALI病因復(fù)雜，多種疾病可并發(fā)ALI，致病環(huán)節(jié)眾多，其中過(guò)度失控的炎性反應(yīng)和促炎、抗炎反應(yīng)失衡是該疾病的主要發(fā)病機(jī)制，炎性細(xì)胞因子和趨化因子間的復(fù)雜X絡(luò)調(diào)控在啟動(dòng)、放大和促進(jìn)病理進(jìn)程中起到重大作用［4］，迄今仍無(wú)有效治療ALI的方法和藥物。木犀草屬屬于黃酮類化合物，因最初從木犀草科木

2、犀草屬草本植物木犀草的葉、莖、枝中分離出而得名，是一種天然色素組分，具有很高的生物活性，如抗炎、抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)劑、抑菌等作用［5］。木犀草素的抗炎作用與抑制炎性介質(zhì)的釋放與核因子κB(nuclearfactorκB，NF-κB)介導(dǎo)的基因表達(dá)有關(guān)。本文旨在探討木犀草素對(duì)ALI是否有干預(yù)和保護(hù)作用及其在體內(nèi)的可能作用機(jī)制。　　1材料與方法　　1．1動(dòng)物健康雄性ICＲ小鼠，體重18～22g，上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)碼:SCXK(滬)2008

3、-0016。飼養(yǎng)于室溫、充分給水和食物。　　1．2試劑及藥物脂多糖(LPS)(大腸桿菌O111:　B4，Sigma公司，076K4020);木犀草素(Sigma公司);地塞米松磷酸鈉注射液(金陵藥業(yè)股份有限公司，080201);戊巴比妥鈉(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，ADZ公司)?！　?．4方法　　1．4．1實(shí)驗(yàn)分組和模型的制備:96只小鼠隨機(jī)平均分為兩批，每批隨機(jī)平均分為6組，分別為正常組、模型組、木犀草素低劑量組、木犀草素中劑量組、木犀草素高劑量組及地塞米松組，每組8只。木犀草素低、中、高劑量組于造

4、模前4d分別灌胃給予25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg的木犀草素，正常組和模型組均灌胃給予相同體積的0．9%氯化鈉溶液。小鼠腹腔注射1%的戊巴比妥鈉(80mg/kg)后暴露氣管，除正常組外，其余組氣管內(nèi)緩慢注入5%的LPS溶液(5mg/kg)，造成小鼠急性肺損傷，正常組以相同方式注入相同體積的0．9%氯化鈉溶液?！　?．4．2肺功能相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)造模6h后，取一批小鼠腹腔注射1%的戊巴比妥鈉(90mg/kg)深度麻醉，氣管插管，將小鼠置于體描箱中。設(shè)置呼吸機(jī)的頻率為90次/min，潮氣量

5、為5ml/kg，呼吸比為15∶10。通過(guò)對(duì)動(dòng)物氣道壓力(Press)、肺容積變化(Volume)的測(cè)量，計(jì)算出呼吸流速(Floin后取出小鼠?！　?．4．3支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞因子的測(cè)定:取另一批小鼠，造模3h后，結(jié)扎右肺，暴露氣管并插管，向左肺注入4℃0．9%氯化鈉溶液1ml進(jìn)行支氣管肺泡灌洗，重復(fù)3次。收集肺泡灌洗液并混勻，于4℃、1500r/min離心15min。收集上清液，分裝后保存于－70℃超低溫冰箱中，ELISA試劑盒檢測(cè)檢測(cè)IL-1β、IL-6和TNF-&alph

6、a;的濃度?！　?．4．4肺組織病理檢測(cè):灌洗結(jié)束后，立刻取右肺上葉以10%甲醛溶液固定，HE染色，制作常規(guī)石蠟病理切片。觀察肺泡壁有無(wú)增厚、充血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)有無(wú)炎癥、水腫，肺泡有無(wú)壞死、出血等情況。　　1．4．5N向炎癥部位聚集外，還能動(dòng)員骨髓白細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，同時(shí)激活內(nèi)皮細(xì)胞。內(nèi)皮細(xì)胞受TNF-α刺激時(shí)，釋放E選素、L選擇素、細(xì)胞間黏附分子1和血管黏附因子1等黏附因子，進(jìn)一步誘導(dǎo)IL-1、IL-6、IL-8、CSF等細(xì)胞因子的分泌，共同參與炎性反應(yīng)。當(dāng)PMN被激活后，TNF-

7、α又能增強(qiáng)PMN的吞噬能力，促進(jìn)PMN脫顆粒和釋放溶酶體，增強(qiáng)PMN呼吸爆發(fā)，產(chǎn)生大量脂質(zhì)代謝產(chǎn)物，破壞毛細(xì)管內(nèi)皮細(xì)胞的屏障功能，增加肺毛細(xì)血管的通透性，刺激內(nèi)皮細(xì)胞釋放大量組織因子，同時(shí)抑制纖溶活性，損害毛細(xì)血管的抗凝功能。這些促炎因子作為重要的信號(hào)因子，進(jìn)一步啟動(dòng)、放大和延續(xù)全身或局部炎性反應(yīng)，呈現(xiàn)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致炎癥失控。本研究表明木犀草素能明顯的降低了TNF-α、IL-1β和IL-6等細(xì)胞因子的含量，其中200mg/kg作用效果更顯著?！　∧壳把芯孔C實(shí)，與炎

8、癥和免疫反應(yīng)關(guān)系密切的許多細(xì)胞因子、黏附分子基因啟動(dòng)部位均含有核因子NF-κB位點(diǎn)。NF-κB對(duì)細(xì)胞因子X絡(luò)具有廣泛的調(diào)控作用，能夠調(diào)控多種細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄。NF-κB的主要形式為p50和p65組成的二聚體，p50是與DNA結(jié)合的部位，p65參與基因轉(zhuǎn)錄的超始調(diào)節(jié)，p65是NF-κB的主要活性形式，并可促進(jìn)p50與DNA結(jié)合，當(dāng)p65與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)抑制蛋白IκB結(jié)合，可掩蓋p50上核定位信號(hào)，僅有