大蒜素對人胃癌sgc7901細胞生長的影響

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1、大蒜素對人胃癌SGC7901細胞生長的影響【關(guān)鍵詞】大蒜素;胃癌細胞;增殖;凋亡　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofallicinontheproliferationandapoptosisofgastriccancercelllineSGC7901.MethodsTheSGC7901cellsinethecellgroetry(FCM).TheexpressionofKi67ingastriccancercellsmunohistochemicalstaining.ResultsAllicineffectivelyinhibited

2、thegroanneratacertainrangeofconcentrations.Theinhibitoryrateent,theapoptosisrateorcell;proliferation;apoptosis　　胃癌是最常見的惡性腫瘤之一。以化療為主的綜合治療是晚期胃癌的主要治療手段，常用的化療藥物大多既能殺傷腫瘤細胞，又能損傷正常的組織細胞，從而對胃癌患者的總體生存期并無明顯改善。因此，在腫瘤化療過程中對腫瘤細胞最大限度的殺傷，而對正常細胞毒性最低的藥物研發(fā)越來越引起重視。大蒜素是從大蒜球莖中分離出的一種油狀液體，主要成分為二烯丙基三硫，是大蒜素發(fā)揮抗癌活性的主要物質(zhì)[1-

3、2]。研究證明大蒜有良好的防癌、抗癌作用[3]。本實驗將大蒜素作用于人胃癌細胞SGC-7901，研究大蒜素對腫瘤細胞的殺傷作用?！　?材料和方法　　1.1材料胃癌細胞株SGC7901(中國科學(xué)院細胞生物研究所)，大蒜素注射液(上海禾豐制藥有限公司)，Ki67抗體及辣根過氧化物酶(HRP)標記的第二抗體(SantaCruz公司)，RPMI1640(Invitriogen公司)，小牛血清(杭州四季青公司)?！　?.2方法　　1.2.1細胞培養(yǎng)人胃癌細胞株SGC7901用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，在37℃、5%CO2的飽和濕度條件下培養(yǎng)。　　1.2.2MTT法檢測細胞抑制率取處

4、于對數(shù)生長期的胃癌SGC7901細胞,常規(guī)胰酶消化后制成單細胞懸液,使細胞密度為(4～5)×107/L;將細胞接種于96孔板中,每孔0.1ml,在37℃、5%CO2的飽和濕度條件下培養(yǎng)24h，分別加入0、3、6、12、24mg/L的大蒜素，繼續(xù)培養(yǎng)48h,隨后每孔加入5g/L的MTT20μl,繼續(xù)培養(yǎng)4h，傾盡上清。每孔加入二甲基亞砜0.1ml，搖床上搖動約15min以充分溶解,用酶標儀在波長570nm處檢測各孔光密度值(D值),計算細胞生長抑制率。每組實驗重復(fù)6次。細胞生長抑制率=(1-實驗組平均D值)/空白對照組平均D值×100%?！　?.2.3流式細胞儀檢測細胞凋亡率大蒜素(3mg

5、/L)作用于胃癌SGC7901細胞12、24和48h后收集細胞，將收獲的各組細胞制成單細胞懸液,加入預(yù)冷的70%冰乙醇,-20℃內(nèi)固定24h,加RNA酶(終濃度為50mg/L)37℃反應(yīng)1h，再加入碘化丙啶溶液(質(zhì)量濃度100mg/L)避光染色30min后，在流式細胞儀上檢測胃癌SGC7901細胞的凋亡率。每組實驗重復(fù)5次?！　?.2.4免疫細胞化學(xué)法檢測Ki67蛋白的表達胃癌SGC7901細胞的單細胞懸液制備同1.2.2方法，將細胞接種于預(yù)先放置蓋玻片的24孔板中,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h，棄去培養(yǎng)液,加入含大蒜素(3mg/L)培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)48h，棄去培養(yǎng)液,用PBS沖洗3次,取出

6、蓋玻片,放入冷丙酮中固定20min。免疫細胞化學(xué)染色嚴格按SP試劑盒操作說明書進行。Ki67蛋白的陽性表達表現(xiàn)為細胞核出現(xiàn)黃色或棕色顆粒。每一個玻片隨機選取5個高倍視野(×400),在每個視野下隨機觀察200個細胞,計算細胞陽性率。并取5個玻片的平均值?！　?.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS10.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以±s表示，采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義?！　?.3大蒜素對胃癌SGC7901細胞Ki67蛋白表達的影響大蒜素(3mg/L)作用于胃癌SGC7901細胞48h后,Ki67蛋白的陽性表達率下降。與對照組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，表

7、3)。表2大蒜素誘導(dǎo)胃癌SGC7901細胞凋亡的作用(n=5，±s，%)表3大蒜素作用胃癌SGC7901細胞Ki67蛋白的陽性表達率(n=5，±s)　　3討論　　大蒜是百合科蔥屬植物的鱗莖，目前認為大蒜中主要的生物活性物質(zhì)是大蒜所特有的含硫化合物，其中最重要的是二烯丙基三硫，又名大蒜素(分子式為C6H10S3)，臨床除抗菌消炎外，也可抑制腫瘤生長，如大蒜素可有效抑制人前列腺癌[4]、結(jié)腸癌HT-29細胞[5]、胃癌SGC7901細胞