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《rassf1a基因表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞化療藥物敏感性的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、RASSF1A基因表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞化療藥物敏感性的影響：芮理，薛萬(wàn)江，李鵬，王鵬，王志偉，李厚祥【摘要】 目的：研究RASSF1A提高肝癌細(xì)胞化療藥物敏感性的作用。方法：通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染法將RASSF1A基因的真核表達(dá)載體及空載體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株QGY-7703，G418篩選穩(wěn)定表達(dá)株，并以RT-PCR和)、絲裂霉素(MMC)、鬼臼乙叉甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、順鉑(DDP)分別作用各細(xì)胞株后，檢測(cè)各細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制率。結(jié)果：經(jīng)800μg/ml的G418最佳篩選濃度篩選QGY-7703細(xì)胞株，成功建立穩(wěn)定表達(dá)RASSF1A基因的肝癌細(xì)胞株。以
2、QGY-7703細(xì)胞為對(duì)照，MMC對(duì)表達(dá)RASSF1A基因的肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率最大為21%。結(jié)論：RASSF1A基因的表達(dá)可明顯提高肝癌細(xì)胞對(duì)MMC的敏感性。RASSF1A的表達(dá)不影響肝癌細(xì)胞QGY-7703對(duì)ADM、VP-16、5-FU和DDP敏感性?！娟P(guān)鍵詞】肝細(xì)胞癌Rasassociationdomainfamily1A藥物敏感性逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) [Abstract]Objective：ToinvestigatetheeffectsofRASSF1Ageneexpressiononthechemosensitivityofhumanhepatocellu
3、larcarcinomacell（HCC）.Methods：RASSF1Aexpressionvectorandemptyvectorine2000reagents.ThepositiveclonesthatexpressedRASSF1AgenestablyeasuredafterthetreatmentoragentsADM,MMC,VP-16,5-FUandDDP.Results：TheHCCcelllinesthatreexpressedRASSF1AgenestablylforQGY-7703cellline.Afterbeingtreatedaximal
4、，anditosensitivityofhumanhepatocellularcarcinomacelltreateda;Rasassociationdomainfamily1A;Drug-sensitivity；RerversetranscriptasepolymerasechainreactionRASSF1A（rasassociationdomainfamily1A）基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)重要的抑癌基因，其抑制肺癌、腎癌、膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)的功能已得到證實(shí)[1~3]。通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染發(fā)現(xiàn)，RASSF1A基因的表達(dá)使肺癌細(xì)胞株NCI-H1299生長(zhǎng)阻止在G1/S期與抑制
5、細(xì)胞周期蛋白cyclinD1的表達(dá)累積有關(guān)[4，5]。但對(duì)于RASS-F1A基因的表達(dá)對(duì)化療藥物敏感性的研究國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道，本研究通過(guò)建立穩(wěn)定表達(dá)RASSF1A基因的肝癌細(xì)胞株，觀察RASSF1A基因表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞化療藥物敏感性的影響?！ ?材料和方法 1．1質(zhì)粒、細(xì)胞株及主要試劑pcDNA3.1(+)RASSF1A質(zhì)粒由美國(guó)Pfeifer博士惠贈(zèng)[1]。真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)購(gòu)自Invitrogen公司，肝癌細(xì)胞株QGY-7703由國(guó)家人類基因組南方研究中心常規(guī)保存，用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。所有細(xì)胞均在37.0℃、5%CO2及飽和濕
6、度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。脂質(zhì)體Lipofectamine2000、G418、TrizolRNA抽提試劑、二抗羊抗鼠IgG-HRP均購(gòu)自Gibco公司；一抗鼠抗人RASSF1A單克隆抗體購(gòu)自eBioscience公司；RNA逆轉(zhuǎn)錄酶SuperScriptⅡreversetranscriptase購(gòu)自Clothe公司；CellTiter96（R）AQueousNon-RadioativeCellProliferationAssay試劑盒購(gòu)自Progema公司?！ ?．2G418對(duì)肝癌細(xì)胞株的毒性試驗(yàn)各細(xì)胞株按1×105/孔接種于6孔板，細(xì)胞貼壁后，按0、200、400、600
7、、800、1000μg/ml的G418濃度加入相應(yīng)培養(yǎng)基，每周換液2次，2周后棄培養(yǎng)基。 1．3穩(wěn)定表達(dá)株的建立嚴(yán)格參照Lipofectamine2000說(shuō)明書(shū)，將純化的質(zhì)粒pcDNA3.1(+)RASSF1A（經(jīng)測(cè)序鑒定）及pcDNA3.1(+)各2μg轉(zhuǎn)染對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的QGY-7703，轉(zhuǎn)染后20h換新鮮培養(yǎng)基，48h后以1︰10稀釋傳代培養(yǎng)，72h后按相應(yīng)濃度的G418進(jìn)行篩選。待轉(zhuǎn)染細(xì)胞呈小克隆生長(zhǎng)時(shí)，用Disco紙片將G418抗性細(xì)胞克隆依次轉(zhuǎn)到96孔板、24孔板、6孔板或35mm培養(yǎng)皿中擴(kuò)大培養(yǎng)。收集細(xì)胞蛋白，RT-PCR和WesternBlot鑒定
