資源描述：
《notch在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、Notch在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義：任雪霞，徐正府，黃介飛，鄂群【摘要】目的：探討Notch1~4在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其腫瘤生物學(xué)意義。方法：采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測36例肝細(xì)胞癌及其癌旁組織中的Notch1~4的表達(dá)。結(jié)果：Notch1~4在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)分別為16例（44.44%）、11例（30.56%）、15例（41.67%）、19例（52.78%），在癌旁組織中的表達(dá)分別為24例（66.67%）、17例（47.22%）、22例（61.11%）、27例（75.00%）。Notch1、Notch2和Notch4在肝細(xì)胞癌
2、中下調(diào)(P＜0.05)。結(jié)論：不同的Notch在肝細(xì)胞癌中的生物學(xué)行為不盡相同，Notch1、Notch2和Notch4表達(dá)下調(diào)，可能具有抑制腫瘤生長的作用?！娟P(guān)鍵詞】肝細(xì)胞癌；Notch；免疫組織化學(xué)法；癌旁組織[Abstract]Objective:TostudytheexpressionofNotch1~4inhepatocellularcarcinoma（HCC）andanalyzeit’soncologicalsignificance.Methods:ImmunohistochemicalstainingeasureNotc
3、h1~4inthecarcinomatoustissuesandpericarcinomatoustissuesin36casesofHCC.Results:TheexpressionsofNotch1~4incarcinomatoustissuesatoustissuestheyayindicatethattheycansuppressthedevelopmentandprogressionofHCC.[Keya；Notch；Immunohistochemistorymethod；PericarcinomatoustissueNot
4、ch是進(jìn)化過程中高度保守的局部細(xì)胞信號結(jié)構(gòu)，參與多種細(xì)胞活動，決定細(xì)胞命運(yùn)，在細(xì)胞分化、增殖、調(diào)亡等方面發(fā)揮重要作用[1]。Notch基因最初于1919年在果蠅體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，Notch突變可影響果蠅的翅膀、眼及剛毛的形成，甚至在胚胎期造成致死性的神經(jīng)發(fā)育障礙。Notch基因編碼的跨膜受體是一個(gè)300kD（p300）的單鏈跨膜蛋白，在細(xì)胞膜形成一個(gè)由180kD（p180）和120kD（p120）多肽段構(gòu)成的異二聚體。p180包含大部分的胞外區(qū)，p120則包含跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，其胞外區(qū)和胞內(nèi)區(qū)均高度保守。當(dāng)配體結(jié)合到胞外區(qū)，Notch蛋白發(fā)生
5、2次斷裂。釋放Notch胞內(nèi)區(qū)（I）進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮生物學(xué)作用[2]。目前在脊椎動物中共發(fā)現(xiàn)了4種Notch同源體，包括Notch1、Notch2、Notch3和Notch4。近年來Notch信號途徑成為發(fā)育生物學(xué)、神經(jīng)學(xué)、血液學(xué)及腫瘤學(xué)等許多領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。本研究采用免疫組織化學(xué)S-P法聯(lián)合檢測Notch1~4在肝細(xì)胞癌及對應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)，旨在探討不同Notch在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)和作用。1材料與方法1.1材料（1）實(shí)驗(yàn)對象：2006年6月~2008年1月南通大學(xué)附屬醫(yī)院和南通市腫瘤醫(yī)院手術(shù)切除的肝癌和對應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本36例
6、，－80℃保存?zhèn)溆谩?%多聚甲醛固定后，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片。術(shù)后腫瘤組織均病理證實(shí)為肝細(xì)胞癌；（2）主要試劑：山羊抗人Notch1多克隆抗體和兔抗人Notch3多克隆抗體為SantaCruzBiotechnology公司產(chǎn)品；山羊抗人Notch2多克隆抗體和鼠抗人Notch4單克隆抗體為RDSystems公司產(chǎn)品；免疫組化檢測試劑盒購自上海晶美生物技術(shù)公司；多聚-L-賴氨酸購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司；DAB試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。1.2方法（1）載玻片處理：玻片經(jīng)洗滌劑浸泡，自來水清洗后泡酸過夜，再自來水中漂
7、洗，蒸餾水沖洗，烤箱干燥后用稀釋的多聚-L-賴氨酸溶液包被，于室溫下晾干備用；（2）染色步驟：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，PBS沖洗?？乖迯?fù)：在10mM檸檬酸鈉緩沖液（pH6.0）中加熱沸騰切片1min，隨后沸點(diǎn)以下溫水中浸9min后PBS沖洗。1%過氧化氫孵育10min，消除內(nèi)源性過氧化物酶后PBS沖洗。封閉液室溫下封閉1h吸去封閉液。分別加山羊抗人Notch1多克隆抗體（1∶50）、兔抗人Notch3多克隆抗體（1∶50）、山羊抗人Notch2多克隆抗體（10μg/ml）和鼠抗人Notch4單克隆抗體（10μg/ml），4℃冰箱過夜。
8、加生物素標(biāo)記的二抗至每張切片，室溫下孵育30min后PBS沖洗。DAB顯色后蘇木素復(fù)染。梯度乙醇脫水、二甲苯透明后封蓋玻片。用已知陽性片作為陽性對照，用PBS替代第一抗體作為陰性對照；（3）結(jié)果判斷：參照邢傳平等[3]的
