hbv感染者il18基因轉(zhuǎn)錄水平及其血清中含量檢測(cè)的臨床意義

《hbv感染者il18基因轉(zhuǎn)錄水平及其血清中含量檢測(cè)的臨床意義》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。

1、HBV感染者IL18基因轉(zhuǎn)錄水平及其血清中含量檢測(cè)的臨床意義：董萍　高露　彭海英　馬偉軍　趙洪禮【摘要】　　目的探討白細(xì)胞介素18(IL18)在乙型肝炎病毒(HBV)感染中的作用。方法從68例HBV感染者(無(wú)癥狀攜帶者15例，慢性肝炎患者35例，重型肝炎患者18例)和24例健康體檢者血液中分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)及血清，應(yīng)用RTPCR及ELISA分別對(duì)IL18基因的轉(zhuǎn)錄和血清中IL18的含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果不同臨床類型HBV感染者之間IL18基因轉(zhuǎn)錄水平的差異均有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，重型肝炎組IL18基因轉(zhuǎn)

2、錄水平高于正常對(duì)照組(P<0.01)，無(wú)癥狀攜帶者組低于正常對(duì)照組(P<0．05)，慢性肝炎組與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0．05)。隨著病情加重，IL18水平上升。肝組織炎癥活動(dòng)度不同的慢性肝炎患者之間IL18基因轉(zhuǎn)錄及其血清中的含量表達(dá)水平的差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，肝組織炎癥程度越重，IL18含量越高。結(jié)論IL18可能參與了宿主對(duì)HBV的免疫應(yīng)答，與肝臟炎癥程度相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒　白細(xì)胞介素18　基因　　　Abstract：ObjectiveToevaluatethepossi

3、blerolesofinterleukin18(ILl8)inhepatitisBvirus(HBV)infectedindividuals.MethodsPeripheralbloodlymphocytesfromthreegroupsofHHVinfectedindividualsincluding15asymptomaticcarriers,35patientsinanthepatitis,andfrom24blooddonors(asnormalcontrols)onocytes(PBMC)iquantitivereversetransc

4、riptionpolymerasechainreaction(PCR)andfloetry.Results(1)Thereongthegroupsofinfectedindividuals.Interestingly,itinanthepatitisgroup,andtheloptomaticcarriergroup.Hoalcontrols.TheseverityofthediseasemationinthoseaytakepartinthehostimmunityagainstHBV,andrelatetotheinflammationdegre

5、eoftheliver.　　KeyRNA轉(zhuǎn)錄水平和血清中IL18含量，旨在探討其在不同類型肝炎患者血清中的變化規(guī)律及其與肝功能受損的關(guān)系?！　?對(duì)象與方法　　1.1研究對(duì)象為本院門診體檢及住院HBV感染者68例，女19例，男49例，年齡19～65(32±9)歲，其中無(wú)癥狀攜帶者15例，慢性肝炎35例，重型肝炎18例。所有病例的診斷均符合2000年9月西安會(huì)議制定的病毒性肝炎防治方案的標(biāo)準(zhǔn)[1]。正常對(duì)照組24例為健康體檢者，女8例，男16例，年齡18～37(27±6)歲，并排除合并感染其他病毒性肝炎。35例慢性肝炎患者均有肝組織病理診斷，肝臟炎癥活

6、動(dòng)度分級(jí)，病理診斷及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按文獻(xiàn)[1]?！　?.2方法　　1.2.1PBMC分離與mRNA的提取[2]每例受試者取血6ml，常規(guī)分離PBMC，用于mRNA檢測(cè)。采用總RNA提取試劑盒(美國(guó)Promega公司)，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)提取。提取出的RNA用紫外分光光度儀測(cè)吸光度(A)值，并進(jìn)行甲醛變性膠電泳，以確定RNA完整性及含量?！　?.2.2RTPCR檢測(cè)IL18mRNA[2]采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)技術(shù)。IL18基因引物和內(nèi)參照肌動(dòng)蛋白引物由本實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)計(jì)，由上海生物工程公司合成。IL18上游引物序列為：5′CGGAAT

7、TCATGTACTTTGGCAAGCTT3′,下游為：5′CGGGATCCCTAGTCTTCGTTTTG3′擴(kuò)增產(chǎn)物490bp。內(nèi)參照β肌動(dòng)蛋白上游引物序列為5′GATCGCTTCCTCGCAACAAACTA3′，下游引物序列為5′ACTGTAGAGATATAATGGACCCCGGAC3′，擴(kuò)增產(chǎn)物174bp。應(yīng)用一步法RTPCR試劑盒(大連寶生物公司)，反應(yīng)體系：10×Buffer5μL，25mmol/LMgcl210μL，10mmol/LdNTP5μL，RNaseInhibitor1μL，AMVRTaseXL1μL，AMVOptimi

8、zedTaq1μL，SpecificupstreamPCRPrimer1μL，SpecificdoPCRPr