苦參堿誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株rpmi8226凋亡的實驗研究

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1、苦參堿誘導多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226凋亡的實驗研究【摘要】　　本研究探討苦參堿對人骨髓瘤細胞株RPMI8226的作用及其機制。用不同濃度苦參堿處理RPMI8226細胞24、48小時，通過形態(tài)學觀察、AnnexinV分析、DNA瓊脂糖電泳、線粒體膜電位檢測觀察苦參堿對RPMI8226細胞的促凋亡作用。結果表明：RPMI8226細胞經(jīng)苦參堿處理后，出現(xiàn)典型的細胞凋亡形態(tài)，凋亡早期細胞膜外翻，DNA瓊脂糖電泳出現(xiàn)典型的梯狀結構，線粒體膜電位崩塌。結論：苦參堿能有效地誘導骨髓瘤細胞株RPMI8226細胞凋亡，凋亡率與藥物劑量和作用時間呈依賴性?！娟P鍵詞】苦參堿多發(fā)性骨

2、髓瘤RPMI8226細胞株細胞凋亡　　ApoptosisofMultipleMyelomaRPMI8226CellLineInducedbyMatrineAbstractThisstudyedtoinvestigatetheeffectofmatrineonmultiplemyelomaRPMI8226celllineanditsmechanism.TheRPMI8226cellsatrinefor24and48hours;thepromotingapoptosiseffectofmatrineonRPMI8226cellsorphology,AnnexinVana

3、lysis,DNAagarosegelelectrophoresis,mitochondrialtransmembranepotentialdetection,etc.TheresultsindicatedthataftertreatmentofRPMI8226cellsatrine,thetypicalmorphologyofcellapoptosisappeared,AnnexinVanalysisshoitochondrialtransmembranepotentialdecreased.Itisconcludedthatthematrinecaneffecti

4、velyinhibitetheRPM8226cellgroedependentmanner.ItispresumedthatthematrineinducesRPMI8226cellapoptosisthroughmitochondrialsignalingpathatrine;multiplemyeloma;RPMI8226cell;apoptosis多發(fā)性骨髓瘤(MM)是一種漿細胞克隆性增生的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，多發(fā)生于老年人。隨著社會人口的老齡化，其發(fā)病率呈逐漸增高的趨勢。幾十年來對MM一直采用激素和細胞毒性藥物聯(lián)合治療，但其仍是一種不可治愈的血液系統(tǒng)腫瘤。由此可

5、見，研發(fā)新的治療方法具有重要的臨床價值［1,2］?？鄥⑹莻鹘y(tǒng)的中草藥,具有抗腫瘤抗炎的作用，苦參堿是其中主要的生物堿。多年來的藥理和臨床研究發(fā)現(xiàn)苦參有抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛解熱作用和強心、降壓、抗心律失常、抗腫瘤作用，特別是抗瘤作用的發(fā)現(xiàn)引起了人們的普遍關注［3］。我們的研究結果證實，一定濃度的苦參堿能夠誘導骨髓瘤細胞RPMI8226凋亡。材料和方法材料多發(fā)性骨髓瘤細胞株RPMI8226細胞由本實驗室保存?？鄥A由中國生物制品、藥品檢定所提供，用RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整濃度為10mg/ml,4℃保存。RPMI1640培養(yǎng)液購自Hyclone公司。AnnexinV凋亡檢測

6、試劑盒,Rh123及PI購自晶美生物技術公司。流式細胞分析儀FACSCalibur為Beckman公司產(chǎn)品。細胞培養(yǎng)RPMI8226細胞培養(yǎng)于含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，取對數(shù)生長期細胞，調(diào)整細胞濃度為2×105/ml，加入苦參堿使其終濃度分別為0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mg/ml，于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)24、48小時。對照組除不加苦參堿外其余相同。細胞活存率由臺盼藍拒染法測定，根據(jù)處理組存活細胞數(shù)與死細胞數(shù)的比例進行計算。生長抑制率及細胞活存率按如下公式計算：對照組細胞數(shù)］×100%活存率=［活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))］×1

7、00%細胞形態(tài)學觀察收集經(jīng)藥物作用后的細胞，涂片晾干，瑞氏染色液染色，油鏡下觀察典型凋亡細胞。AnnexinV/PI測定用0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mg/ml濃度苦參堿處理骨髓瘤細胞RPMI822624、48小時后輕輕收獲細胞1×106個，用冷PBS洗1遍后加入490μl結合緩沖液，輕輕混勻細胞后加入5μlAnnexinV和5μlPI，10分鐘后用流式細胞儀檢測［4］。DNA瓊脂糖凝膠電泳樣品經(jīng)1mg/ml苦參堿作用24、48小時后，對每種樣品收集1×106個細胞，酚－氯仿常規(guī)提取DNA，取樣加入1.5％瓊脂糖凝膠電泳1-2