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《索氏提取法提取白術(shù)內(nèi)酯ⅰ的工藝研究》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、索氏提取法提取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的工藝研究作者:衛(wèi)修來(lái),陳鎮(zhèn),夏泉,許杜娟【摘要】 目的建立白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ索氏提取的最佳工藝。方法采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化的索氏提取工藝,以石油醚為提取溶劑,從白術(shù)(炒)中提取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ,高效液相色譜法測(cè)定提取物中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量。結(jié)果采用索氏提取法提取白術(shù)(炒)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的最佳工藝為白術(shù)(炒)的粒度為80目,加120ml石油醚提取12h。結(jié)論所確定的炒白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ提取工藝合理可行,值得進(jìn)一步向工業(yè)化生產(chǎn)推廣?!娟P(guān)鍵詞】白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ索氏提取正交設(shè)計(jì) 白術(shù)始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》并列為上品,原名“術(shù)”,來(lái)源于菊科植物白術(shù)Atractylodesmacroc
2、ephalaKoidz干燥根,主產(chǎn)于浙江、安徽、湖北、湖南等省。其性味甘、苦、溫,具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎等功效[1]。白術(shù)的主要化學(xué)成分為揮發(fā)油、內(nèi)酯類化合物及多糖[2]。其中內(nèi)酯類成分具有抗炎、抗腫瘤作用,該類成分還具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收的功能,尤以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ作用明顯[3]。本研究通過(guò)對(duì)白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ索氏提取工藝的最佳條件的研究,為今后進(jìn)一步研究其藥理作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 1儀器與試藥 1.1儀器 索氏提取器(中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)玻璃儀器廠);Xettler-Toledo公司)?! ?.2試藥對(duì)照品白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ(butenolideⅠ)(純度≥98
3、%,編號(hào)1396-070212,產(chǎn)地:中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心);白術(shù)(炒)購(gòu)自安徽省國(guó)投藥業(yè),批號(hào)071120,經(jīng)安徽中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)與中藥資源教研室劉守金教授鑒定為白術(shù)同屬。石油醚、苯、醋酸乙酯等均為分析純,甲醇為色譜純,水為重蒸餾水?! ?方法與結(jié)果 2.1提取方法白術(shù)(炒)飲片400g,低溫真空干燥并粉碎,分別過(guò)60,80,100目篩備用。分別按表1實(shí)驗(yàn)方案精密稱取不同粒度的白術(shù)(炒)粉末15g置索氏提取器中,加入規(guī)定量的石油醚,于水浴鍋上提取,至規(guī)定時(shí)間后取提取液過(guò)濾,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干,殘?jiān)舆m量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中,取提取液適量于離心機(jī)
4、上離心,上清液作為供試品溶液?! ?.2正交實(shí)驗(yàn)考察提取工藝根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選用影響提取效果的3個(gè)主要因素:粒度(A)、溶劑量(B)和提取時(shí)間(C),每一個(gè)因素各選3個(gè)水平,制定因素水平表。見(jiàn)表1。表1正交設(shè)計(jì)因素水平(略) 2.3TLC定性鑒別分別取供試品溶液1~9號(hào)及對(duì)照品甲醇溶液(濃度為1mg/ml)各2μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G板上,置展開(kāi)槽展開(kāi),展開(kāi)劑為石油醚∶苯∶醋酸乙酯=15∶2∶1,展距為9cm,取出,烘干,噴以10%硫酸乙醇置烤箱中,設(shè)定溫度90℃放置30min后,于可見(jiàn)光及365nm紫外燈下檢視?! ?.4HPLC法測(cè)定白術(shù)(炒)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量
5、 2.4.1色譜條件DikmaKromasilC18(150mm×4.6mm)色譜柱,以甲醇∶水=60∶40為流動(dòng)相,流速為1.0ml/min,柱溫為30℃,檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm,進(jìn)樣量為10μl?! ?.4.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ1mg,加甲醇溶解成1mg/ml的儲(chǔ)備液,精密吸取儲(chǔ)備液適量,加甲醇稀釋成濃度為0.50,0.25,0.12,0.06,0.03,0.01mg/ml的溶液作為對(duì)照品溶液,照上述色譜條件下進(jìn)樣,以峰面積Y對(duì)質(zhì)量濃度X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程為Y=28.931X+48.38,r=0.9998?! ?.4.3精密度實(shí)驗(yàn)取濃度為0.0
6、3mg/ml對(duì)照品溶液,在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次,計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的峰面積RSD為1.12%(n=5)?! ?.4.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液,每隔一定時(shí)間進(jìn)樣,測(cè)定峰面積。結(jié)果24h內(nèi)供試品峰面積的RSD為0.29%(n=6),表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。 2.4.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品6份,分別按供試品溶液的制備方法進(jìn)行提取、制備、測(cè)定。結(jié)果白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量的RSD為1.04%,表明方法的重復(fù)性良好。 2.4.6樣品含量的測(cè)定取樣品溶液1~9號(hào)各100μl,分別加入400μl的甲醇,用渦旋儀振動(dòng)混合,照上述色譜條件下進(jìn)樣10μl進(jìn)行分析,由回歸面
7、積計(jì)算供試品樣品中白術(shù)內(nèi)酯I的含量。對(duì)照品溶液和供試品溶液的色譜圖見(jiàn)圖2?! ?.4.7含量測(cè)定結(jié)果根據(jù)測(cè)得的峰面積,代入回歸方程,可計(jì)算出1~9號(hào)實(shí)驗(yàn)方法所得到的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量(mg),進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析見(jiàn)表2。表2樣品含量測(cè)定結(jié)果(略) 極差Rj反映各因素對(duì)指標(biāo)影響的程度,極差越大,影響程度越大。本實(shí)驗(yàn)3個(gè)因素排列順序?yàn)镃﹥A﹥B,其中各因素水平分析結(jié)果為A:3﹥2﹥1;B:3﹥2﹥1;C:3﹥1﹥2,最佳處方應(yīng)該為A2B3C3。因此采用索氏提取法的最佳工藝為使用粒度80目的白術(shù)(炒),加120ml石油醚回流提取12h的提取效率較高