索氏提取法提取白術(shù)內(nèi)酯ⅰ的工藝研究

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1、索氏提取法提取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的工藝研究作者：衛(wèi)修來(lái)，陳鎮(zhèn)，夏泉，許杜娟【摘要】　　目的建立白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ索氏提取的最佳工藝。方法采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化的索氏提取工藝，以石油醚為提取溶劑，從白術(shù)(炒)中提取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ，高效液相色譜法測(cè)定提取物中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量。結(jié)果采用索氏提取法提取白術(shù)（炒）中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的最佳工藝為白術(shù)（炒）的粒度為80目，加120ml石油醚提取12h。結(jié)論所確定的炒白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ提取工藝合理可行，值得進(jìn)一步向工業(yè)化生產(chǎn)推廣?！娟P(guān)鍵詞】白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ索氏提取正交設(shè)計(jì)　　白術(shù)始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》并列為上品，原名“術(shù)”，來(lái)源于菊科植物白術(shù)Atractylodesmacroc

2、ephalaKoidz干燥根，主產(chǎn)于浙江、安徽、湖北、湖南等省。其性味甘、苦、溫，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎等功效［1］。白術(shù)的主要化學(xué)成分為揮發(fā)油、內(nèi)酯類化合物及多糖［2］。其中內(nèi)酯類成分具有抗炎、抗腫瘤作用，該類成分還具有調(diào)節(jié)胃腸道功能和促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收的功能，尤以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ作用明顯［3］。本研究通過(guò)對(duì)白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ索氏提取工藝的最佳條件的研究，為今后進(jìn)一步研究其藥理作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。　　1儀器與試藥　　1.1儀器　　索氏提取器（中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)玻璃儀器廠）；Xettler-Toledo公司）?！　?.2試藥對(duì)照品白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ(butenolideⅠ)（純度≥98

3、%，編號(hào)1396-070212，產(chǎn)地：中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心）；白術(shù)（炒）購(gòu)自安徽省國(guó)投藥業(yè)，批號(hào)071120，經(jīng)安徽中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)與中藥資源教研室劉守金教授鑒定為白術(shù)同屬。石油醚、苯、醋酸乙酯等均為分析純，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水?！　?方法與結(jié)果　　2.1提取方法白術(shù)（炒）飲片400g，低溫真空干燥并粉碎，分別過(guò)60，80，100目篩備用。分別按表1實(shí)驗(yàn)方案精密稱取不同粒度的白術(shù)（炒）粉末15g置索氏提取器中，加入規(guī)定量的石油醚，于水浴鍋上提取，至規(guī)定時(shí)間后取提取液過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，殘?jiān)舆m量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，取提取液適量于離心機(jī)

4、上離心，上清液作為供試品溶液?！　?.2正交實(shí)驗(yàn)考察提取工藝根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用影響提取效果的3個(gè)主要因素：粒度(A)、溶劑量(B)和提取時(shí)間(C)，每一個(gè)因素各選3個(gè)水平，制定因素水平表。見(jiàn)表1。表1正交設(shè)計(jì)因素水平（略）　　2.3TLC定性鑒別分別取供試品溶液1～9號(hào)及對(duì)照品甲醇溶液（濃度為1mg/ml）各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，置展開(kāi)槽展開(kāi)，展開(kāi)劑為石油醚∶苯∶醋酸乙酯=15∶2∶1，展距為9cm，取出，烘干，噴以10%硫酸乙醇置烤箱中，設(shè)定溫度90℃放置30min后，于可見(jiàn)光及365nm紫外燈下檢視?！　?.4HPLC法測(cè)定白術(shù)（炒）中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量　

5、　2.4.1色譜條件DikmaKromasilC18(150mm×4.6mm)色譜柱，以甲醇∶水＝60∶40為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，進(jìn)樣量為10μl?！　?.4.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ1mg，加甲醇溶解成1mg/ml的儲(chǔ)備液，精密吸取儲(chǔ)備液適量，加甲醇稀釋成濃度為0.50，0.25，0.12，0.06，0.03，0.01mg/ml的溶液作為對(duì)照品溶液，照上述色譜條件下進(jìn)樣，以峰面積Y對(duì)質(zhì)量濃度X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為Y＝28.931X＋48.38，r＝0.9998?！　?.4.3精密度實(shí)驗(yàn)取濃度為0.0

6、3mg/ml對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的峰面積RSD為1.12%(n＝5)?！　?.4.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果24h內(nèi)供試品峰面積的RSD為0.29%(n＝6)，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。　　2.4.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品6份，分別按供試品溶液的制備方法進(jìn)行提取、制備、測(cè)定。結(jié)果白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量的RSD為1.04%，表明方法的重復(fù)性良好。　　2.4.6樣品含量的測(cè)定取樣品溶液1～9號(hào)各100μl，分別加入400μl的甲醇，用渦旋儀振動(dòng)混合，照上述色譜條件下進(jìn)樣10μl進(jìn)行分析，由回歸面

7、積計(jì)算供試品樣品中白術(shù)內(nèi)酯I的含量。對(duì)照品溶液和供試品溶液的色譜圖見(jiàn)圖2?！　?.4.7含量測(cè)定結(jié)果根據(jù)測(cè)得的峰面積，代入回歸方程，可計(jì)算出1～9號(hào)實(shí)驗(yàn)方法所得到的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量(mg)，進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析見(jiàn)表2。表2樣品含量測(cè)定結(jié)果（略）　　極差Rj反映各因素對(duì)指標(biāo)影響的程度，極差越大，影響程度越大。本實(shí)驗(yàn)3個(gè)因素排列順序?yàn)镃﹥A﹥B，其中各因素水平分析結(jié)果為A：3﹥2﹥1；B：3﹥2﹥1；C：3﹥1﹥2，最佳處方應(yīng)該為A2B3C3。因此采用索氏提取法的最佳工藝為使用粒度80目的白術(shù)（炒），加120ml石油醚回流提取12h的提取效率較高