無血清體外培養(yǎng)樹突狀細胞的研究

無血清體外培養(yǎng)樹突狀細胞的研究

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1、無血清體外培養(yǎng)樹突狀細胞的研究作者:張懷東,宋振嵐,李偉平【摘要】本研究的目的是建立對外周血來源的樹突狀細胞(dendriticcell,DC)的無血清培養(yǎng)方案。以含胎牛血清(FCS)、人AB血清的培養(yǎng)液作為對照。分離健康志愿者外周血單個核細胞(PBMNC),在不同培養(yǎng)液中分別加入GM-CSF(100ng/ml)、IL-4(500U/ml)培養(yǎng)6天,再分別加入鈣離子載體A23187(100ng/ml)繼續(xù)培養(yǎng)24小時,于倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),流式細胞術分析細胞表型,MTT比色法檢測各組DC刺激同種異體外周血T細胞增殖的能力和DC刺激的T細胞對K562細胞的殺傷作用。結果表明:無血清培

2、養(yǎng)組培養(yǎng)出典型形態(tài)的DC,其表面CD14分子的表達明顯減少,CD83、HLA-DR、CD-freeMedium   AbstractThisstudyedtoinvestigatetheprotocolinvitrotoincubatethedendriticcell(DC)derivedfromperipheralbloodmonocytesusingserum-freemediumX-VIVO20.PeripheralbloodmonocytesfromhealthydonorslGM-CSFand500U/mlIL-4,respectively.Aftercultivationfo

3、r6days,theylcalciumionophoreA23187.Aftercultivationfor24hoursthecellularmorphologyicroscope,thesurfacemarkersetry,theproliferationofallogeicTcellsetry,thespecificcytotoxicityofTcellsprimedinedbyMTTassay.Theresultssho-free,fetalcalfserum(FCS)andhumanABserummediums,cellsdisplayedcharacteristicmorph

4、ologicalfeaturesofDC.SimultaneouslyCD14expressionethodscouldevidentlystimulatetheproliferationofallogeicTcell.Asparedcontaininggroups,theculturedcellsintheserum-freegroupsshoostthesameallo-stimulatorycapabilityandcellularmorphologyandsurfacemarkers,andTlymphocytesprimedilarkillingactivitytoK562(P

5、>0.05).ItisconcludedthatthereisnosignificanceinDCnumbers,morphology,epitopeandabilitytostimulatetheproliferationofallogeicTcellsbet-freeX-VIVO20mediumandDCinducedbyserum-containedmedium.DCculturedandinducedbyserum-freemediumis-freemedium;calciumionophore;peripheralblood  樹突狀細胞是StEinman和Cohn于19

6、73年首先報道的,因其成熟時有樹突樣或偽足樣突起而得名[1]。它源于造血干細胞,廣泛分布于淋巴組織和非淋巴組織中,是機體內(nèi)功能最強的抗原呈遞細胞(antigen-presentingcells,APC)[2],其最大的特點是能夠顯著刺激初始型T細胞增殖,是機體免疫反應的始動者。目前,多數(shù)體外培養(yǎng)液包含胎牛血清、混合人(AB型)血清或自體血清,由于血清中包含個體差異性的生長因子,異體血清又有外來抗原及危險感染侵入的弊端,人自體血清中又含有某些抑制DC生長的因子,這將使DC的臨床應用受到限制。本實驗采用無血清培養(yǎng)液X-VIVO20則避免了上述缺點。本實驗通過比較X-VIVO20與含F(xiàn)CS、人

7、AB血清的培養(yǎng)基對體外誘導擴增DC的影響,為進  一步優(yōu)化無血清培養(yǎng)液條件,使DC療法應用于臨床提供實驗依據(jù)?! 〔牧虾头椒ā 〔牧稀 ×馨图毎蛛x液(Ficoll,密度1.077)購于上海華精生物高科技有限公司,rhGM-CSF購于華北制藥集團金坦生物技術開發(fā)有限公司,rhIL-4、人血白蛋白、四甲基偶氮唑鹽(MMT)、鈣離子載體A23187均為Sigma公司產(chǎn)品,人AB血清(大連市中心血站產(chǎn)品),胎牛血清(民海生物工程有限公司產(chǎn)

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