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1、用基因芯片研究異丙酚麻醉大鼠丘腦基因表達譜作者：姜秀良，馬加海，張惠，徐禮鮮，楊昌照，田明【關(guān)鍵詞】基因芯片【Abstract】AIM:Toinvestigatethealterationofgeneexpressionprofileofthalamusinratsanesthetizedlyto2groups(6ineachgroup).9g/Lsaline,100mg/kgpropofolinisteredintraperitoneallyincontrolgroupandpropofolgrouprespectively.On
2、ehourlater,thalamusplifiedthroughreversetranscriptreaction.BiotinlabeledcRNAplate.Afterpurificationandfragmentation,thecDNAongthetotal1323probesdetected,221genesshoongthemhadexpressionlevelalterationover2times.Thedifferentiallyexpressedgenesainlyclassifiedintoionchanne
3、ls,signaltransduction,transcriptionfactorsandcytokines,etc.CONCLUSION:Propofolcaninduceasignificantalterationofgeneexpressionprofileofthalamusinrats.Genechipisaneffectivemeansofstudyingtheunderlyingmechaninsmofgeneralanesthetics.【Keyus;rat【摘要】目的:運用基因芯片研究異丙酚麻醉大鼠丘腦基因表達譜的
4、變化.方法:SD大鼠12只，隨機分為對照組和異丙酚組，每組6只.對照組、異丙酚組大鼠分別腹腔注射生理鹽水或100mg/kg異丙酚.1h后，取丘腦，抽提RNA，以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以cDNA為模板轉(zhuǎn)錄生物素標記的cRNA，cRNA經(jīng)提純、片斷化后與大鼠神經(jīng)生物學(xué)表達芯片U34雜交；雜交后的芯片用掃描儀檢測信號，收集圖像，用MicroarraySuiteVersion5.0軟件分析差異表達基因并對其作初步功能分析.結(jié)果：1323條待測基因中，異丙酚麻醉后221條基因差異表達，上調(diào)表達80條，下調(diào)表達141條，其中差異表達超
5、過兩倍的為53條.差異性表達的基因功能可分為離子通道、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄因子、細胞因子等.結(jié)論：異丙酚麻醉可誘導(dǎo)大鼠丘腦眾多基因的差異表達，基因芯片是研究全麻機制的有效方法.【關(guān)鍵詞】異丙酚；基因芯片；基因表達譜；丘腦；大鼠0引言全麻藥作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnervoussystem,S)的確切機制目前仍不清楚［1］.異丙酚主要是引起意識消失、體動反射消失和學(xué)習(xí)、記憶功能喪失等全麻效應(yīng).近年來，又證實其具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)吐、腦保護及抗驚厥等作用.基因芯片技術(shù)具有高通量、并行性和快速準確的優(yōu)點，已應(yīng)用于藥物作用靶位和機制的研究［2］
6、.丘腦是中繼外周傷害性信息的主要部位之一和全麻藥作用的重要腦區(qū)［3-5］.我們運用基因芯片研究異丙酚麻醉大鼠丘腦基因表達譜的變化，探討異丙酚的S作用機制.1材料和方法1.1材料成年健康雌性SD大鼠(第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供)12只，體質(zhì)量195～223g，實驗前將大鼠放置在安靜、避強光的環(huán)境中飼養(yǎng)48h以上.隨機分為對照組和異丙酚組，每組6只.異丙酚組大鼠腹腔注射100mg/kg異丙酚（AstraZeneca），對照組注射同等體積的生理鹽水.1.2方法1.2.1取材腹腔注射1h后，大鼠斷頸處死，取全腦組織，置于冰上，切取丘腦，切
7、成0.3~0.5cm小塊，置于盛有RNAlater（Qiagen）的凍存管中，-20℃保存.1.2.2RNA抽提、探針制備和芯片雜交簡要步驟如下：用TRIzolReagent（Invitrogen）試劑盒抽提丘腦組織總RNA；以RNA為模板，合成單鏈及雙鏈cDNA；再以雙鏈cDNA為模板，體外轉(zhuǎn)錄合成生物素標記的cRNA；cRNA用RNeasy（Qiagen）試劑盒純化后，進行片段化處理，而后與測試芯片Test3（Affymetrix）預(yù)雜交進行質(zhì)控；符合要求后分別與兩張大鼠神經(jīng)生物學(xué)表達芯片U34（Affymetrix）雜交；洗脫
8、處理后染色，以G2500AGeneArrayScanner（Affymetrix）掃描檢測信號，收集圖像.統(tǒng)計學(xué)處理:應(yīng)用MicroarraySuiteVersion5.0軟件（Affymetrix）分析某基因是否有表達，以及在異丙酚
