口蹄疫病毒受體豬源整聯(lián)蛋白β6亞基配體結(jié)合域多克隆抗體的制備和特性分析

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1、口蹄疫病毒受體豬源整聯(lián)蛋白β6亞基配體結(jié)合域多克隆抗體的制備和特性分析：高閃電,?；菔|,獨(dú)軍政,王景鋒,周建華,趙建勇,謝慶閣【摘要】目的:表達(dá)口蹄疫病毒受體豬源整聯(lián)蛋白β6亞基配體結(jié)合域β6LBD,并制備兔抗β6LBD多克隆抗體。方法:利用PCR方法擴(kuò)增整聯(lián)蛋白β6LBD基因片段,經(jīng)BamHⅠ和XhoⅠ進(jìn)行雙酶切后連入pGEX4T1原核表達(dá)載體,構(gòu)建的pGEX4T1β6LBD重組表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)菌株,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDSPAGE鑒定融合蛋白的表達(dá)并提取包涵體

2、,純化目的蛋白。然后用純化的蛋白免疫新西蘭大耳白兔制備其多克隆抗體,以ELISA方法測(cè)定抗體效價(jià),并以r約為42000的GSTβ6LBD融合蛋白,與預(yù)期結(jié)果相符。目的蛋白純化后,在電泳圖片上顯示較為清晰的單一條帶,用純化GSTβ6LBD免疫新西蘭大耳白兔制備的多克隆抗體效價(jià)達(dá)1∶12800以上,具有較高的特異性。結(jié)論:制備了具有高親和性和特異性的抗豬源整聯(lián)蛋白β6LBD多克隆抗體,為深入研究整聯(lián)蛋白β6在口蹄疫病毒感染過程中的作用了奠定基礎(chǔ)?！娟P(guān)鍵詞】口蹄疫病毒;受體;整聯(lián)蛋白β6亞基;配體結(jié)合域

3、;多克隆抗體［Abstract］AIM:ToinducetheexpressionofFMDVreceptorintegrinβ6subunitligandbindingdomaininE.coliandpreparetherabbitpolyclonalantibodyagainstit.METHODS:Thefragmentcodingβ6ligandbindingdomainplifiedbyPCRanddoublydigestedHⅠandXhoⅠ.ThenitidpGEX4T1β6

4、LBD.AfterpGEX4T1β6LBDedintoE.coliBL21(DE3)andinducedbyIPTG,theexpressionoffusionproteinsmunizedtopreparepolyclonalantibodyagainstβ6LBD.GSTβ6LBDantiserumonstratedthatthefusionproteinGSTβ6LBDolecularain;polyclonalantibody［摘要］目的:表達(dá)口蹄疫病毒受體豬源整聯(lián)蛋白β6亞基配體結(jié)

5、合域β6LBD,并制備兔抗β6LBD多克隆抗體。方法:利用PCR方法擴(kuò)增整聯(lián)蛋白β6LBD基因片段,經(jīng)BamHⅠ和XhoⅠ進(jìn)行雙酶切后連入pGEX4T1原核表達(dá)載體,構(gòu)建的pGEX4T1β6LBD重組表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)菌株,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDSPAGE鑒定融合蛋白的表達(dá)并提取包涵體,純化目的蛋白。然后用純化的蛋白免疫新西蘭大耳白兔制備其多克隆抗體,以ELISA方法測(cè)定抗體效價(jià),并以r約為42000的GSTβ6LBD融合蛋白,與預(yù)期結(jié)果相符。目的蛋白純化后,在電

6、泳圖片上顯示較為清晰的單一條帶,用純化GSTβ6LBD免疫新西蘭大耳白兔制備的多克隆抗體效價(jià)達(dá)1∶12800以上,具有較高的特異性。結(jié)論:制備了具有高親和性和特異性的抗豬源整聯(lián)蛋白β6LBD多克隆抗體,為深入研究整聯(lián)蛋白β6在口蹄疫病毒感染過程中的作用了奠定基礎(chǔ)。［關(guān)鍵詞］口蹄疫病毒;受體;整聯(lián)蛋白β6亞基;配體結(jié)合域;多克隆抗體口蹄疫（footandmouthdisease,FMD）是由口蹄疫病毒(footandmouthdiseasevirus,FMDV)引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、

7、高度接觸傳染性并可遠(yuǎn)距傳播的動(dòng)物疫病。FMDV是微小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、口瘡病毒屬(Aphthovirus)的代表性成員,主要通過與其受體整聯(lián)蛋白相互作用感染宿主。目前已報(bào)道了4種RGD依賴性的FMDV整聯(lián)蛋白受體(αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8),它們大都能與FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VP1的GH突環(huán)上含有的高度保守的ArgGlyAsp(RGD)基序位特異性結(jié)合［1,2］。αvβ6整聯(lián)蛋白不僅是決定FMDV嗜性的主要受體,而且在病毒與受體結(jié)合隨后的脫殼、復(fù)制等過程中也

8、發(fā)揮著重要作用［3］。整聯(lián)蛋白分子由Ⅰ型跨膜蛋白α、β兩亞基經(jīng)非共價(jià)鍵連接組成異二聚體（heterodimer),整聯(lián)蛋白β亞基靠近外側(cè)N端的Mr為40000～50000的氨基酸殘基通過鏈內(nèi)二硫鍵緊密折疊在一起,形成配體結(jié)合域（LigandbindingDomain,LBD）,與整聯(lián)蛋白和配體結(jié)合有關(guān)［4］。我們?cè)讷@得β6亞基基因的基礎(chǔ)上進(jìn)一步表達(dá)其配體結(jié)合域并制備其多克隆抗體,為進(jìn)一步研究αvβ6整聯(lián)蛋白受體在介導(dǎo)口蹄疫病毒感染過程中的作用機(jī)制奠定基