人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響

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1、人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響：孔霞,唐俊明,郭凌鄖,楊建業(yè),陳龍,黃永章,王家寧【摘要】目的：探索人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（SDF1）對間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）增殖的影響.方法：采用經(jīng)典的全骨髓貼壁法培養(yǎng)MSC,通過成骨、成脂肪等多向誘導(dǎo)分化以及流式細(xì)胞儀分析其表面標(biāo)記（CD133，CD34，CD90，CD105）等鑒定MSC特征；以P3MSC為實驗材料，采用H3TdR參入法分析SDF1對MSC增殖的影響.以50nmol/L渥曼青霉素，10mmol/LLY294002，50m

2、mol/LPD98059，0.1g/LAMD3100等分別處理P3MSC,觀察SDF1影響MSC增殖的信號機(jī)制.結(jié)果：培養(yǎng)的MSC呈現(xiàn)出CXCR4，CD90和CD105強(qiáng)陽性，具有成骨、成脂肪等多向分化能力；含有100mg/LSDF1的20mL/L促進(jìn)了MSC增殖，而含有100mg/LSDF1的150mL/LFBS抑制了MSC增殖.SDF1抑制MSC增殖的效應(yīng)與其使MSC停滯在G1/S期有關(guān).促分裂原活化蛋白激酶P38MAPK阻斷劑SB203580和CXCR4阻斷劑AMD3100取消了SDF

3、1抑制MSC增殖的效應(yīng)，而細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶阻斷劑PD98059加強(qiáng)了SDF1抑制MSC增殖的效應(yīng).結(jié)論：SDF1/CXCR4介導(dǎo)的抑制MSC增殖的效應(yīng)與促分裂原活化蛋白激酶和細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶等信號分子有關(guān).【關(guān)鍵詞】人基質(zhì)細(xì)胞源衍生因子1;間充質(zhì)干細(xì)胞;增殖;促分裂原活化蛋白激酶　　【Abstract】AIM:Toexploretheeffectofstromalcellderivedfactor1alpha(SDF-1α)onmesenchymalstemcell(MSC)proli

4、feration.METHODS:MSCcultureedarroethod;MSCultidifferentiationandsurfacemarkerassay(CXCR4,CD133,CD34,CD90,CD105);AfterMSCsg/LSDF1a,50nmol/Lannin,10mmol/LLY294002,50mmol/LPD98059and0.1g/LAMD3100inhibitors,theproliferationrateseasuredby［3H］thymidineinco

5、rporationassay.RESULTS:CulturedMSCshadtheabilityofmultidifferentiationandhighlyexpressedCXCR4,CD105andCD90.20mL/LFBSincluding100mg/LSDF1apromotedMSCproliferation,hoL/LFBSincluding100mg/LSDF1acouldinducemarkedinhibitionofMSCproliferationthroughthearre

6、stintheG1/Scheckpoint.AnditsinhibitoryeffectonMSCproliferationitogenactivatedproteinkinase（MAPK）inhibitorSB203580andCXCR4inhibitorAMD3100.Hoesenchymalstemcell;proliferation;MAPK　　0引言　　骨髓的間充質(zhì)干細(xì)胞（bonemarroesenchymalstemcell,MSC）在一定條件下可以分化為心肌、成骨、軟骨、脂肪、胰島、

7、肌腱等多種類型的細(xì)胞［1］.在心肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、冠脈內(nèi)等不同途徑移植MSC或粒系集落刺激因子動員骨髓發(fā)現(xiàn)其可以遷移到心肌梗死部位，通過參與血管新生、心肌再生等改善修復(fù)受損的心臟［1］.有研究［2］發(fā)現(xiàn)，SDF1/CXCR4軸不僅調(diào)控造血干細(xì)胞（hematopoieticstemcell，HSC）的遷移，而且也影響HSC的增殖和分化.新近研究發(fā)現(xiàn)MSC表達(dá)CXCR4［3］，顯示SDF1/CXCR4軸可介導(dǎo)MSC的遷移［4］.但是就SDF1/CXCR4軸是否影響MSC的增殖分化，目前仍不清楚.我們利用

8、H3TdR參入法檢測SDF1α對MSC增殖的影響，并初步探索SDF1α影響MSC增殖的信號機(jī)制.　　1材料和方法　　1.1材料SPF級EM培養(yǎng)基（美國Gibcol公司）；胎牛血清（fetalbovineserum，F(xiàn)BS，杭州四季青生物工程有限公司）；胰酶（美國Sangon公司）；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國科學(xué)儀器公司）；倒置熒光顯微鏡(日本Nikon公司)；恒低溫切片機(jī)(德國Leica公司)；圖像分析系統(tǒng)（美國MediaCyberics公司）；hSD