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《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、窗體頂部中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15670-1995農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法ToxicologicaltestmethodsofPesticidesforregistration1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)的方法、條件的基本要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于為農(nóng)藥登記而進(jìn)行的毒理學(xué)試驗(yàn)。2急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)2.1目的求出試驗(yàn)農(nóng)藥對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的半數(shù)致死劑量(LD50);通過(guò)觀察急性毒性效應(yīng)的臨床表現(xiàn),初步估測(cè)毒作用的靶器官和可能的毒作用機(jī)理;為亞慢性、慢性和其他毒性試驗(yàn)的劑量水平設(shè)計(jì)提供參考;為急性毒性分級(jí)和制定安全防護(hù)措施提供
2、依據(jù)。2.2試驗(yàn)農(nóng)藥原藥和制劑。2.3試驗(yàn)動(dòng)物2.3.1主要選用品系、遺傳背景明確的初年大鼠。各劑量組內(nèi)同性別動(dòng)物體重差異應(yīng)小于平均體重的10%,組間同性別動(dòng)物體重均值差異應(yīng)小于5%。2.3.2每一劑量組的大鼠8~10只(雌雄各半),試驗(yàn)前要對(duì)動(dòng)物觀察一周,確認(rèn)健康后,方可使用。2.4劑量分組2.4.1至少應(yīng)設(shè)4~5個(gè)劑量組,各劑量組之間要有適當(dāng)?shù)膭┝块g距。以便各組出現(xiàn)不同程度的毒性效應(yīng)(死亡率),求得劑量效應(yīng)曲線及LD50。2.4.2如劑量達(dá)5000mg/kg體重以上,動(dòng)物仍不出現(xiàn)死亡,則不需要進(jìn)行更高劑量的試驗(yàn)。2.5給藥方
3、法及觀察時(shí)間2.5.1動(dòng)物給藥前應(yīng)隔夜禁食但不禁水,稱重后,一次灌胃給藥,給藥后至少間隔2h進(jìn)食。2.5.2灌胃量大鼠按100g體重給1mL,小鼠按20g體重給0.4mL計(jì)算,灌胃可用水溶液、油溶液或懸液。2.5.3給藥后立即觀察并記錄動(dòng)物的中毒表現(xiàn),癥狀出現(xiàn)和消失的時(shí)間及死亡時(shí)間。給藥當(dāng)日應(yīng)連續(xù)觀察,其后,每日至少觀察2次,觀察期為14d。如在給藥96h后出現(xiàn)遲發(fā)性新效應(yīng),則應(yīng)延長(zhǎng)觀察期至3周或4周。2.6觀察指標(biāo)2.6.1中毒癥狀全面觀察中毒的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程和規(guī)律以及中毒特點(diǎn)和毒作用的靶器官。觀察的系統(tǒng)包括:a.中樞神經(jīng)系統(tǒng)
4、和神經(jīng)肌肉系統(tǒng):體位異常、叫聲異常、不安、呆滯、痙攣、抽搐麻痹、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、對(duì)外反應(yīng)過(guò)敏或遲鈍;b.植物神經(jīng)系統(tǒng):瞳孔擴(kuò)大或縮小、流涎或流淚;c.呼吸系統(tǒng):鼻孔流液、鼻翼煽動(dòng)、呼吸深緩、呼吸過(guò)速、蜂腰;d.泌尿生殖系統(tǒng):會(huì)陰部污穢、有分泌物、陰道或乳房腫脹;e.皮膚和毛:皮膚充血、紫紺、被毛蓬松、污穢;f.眼:眼球突出、結(jié)膜充血、角膜混濁;g.消化系統(tǒng):腹泄、厭食。2.6.2體重給藥前、死亡時(shí)各稱量一次體重,觀察期間每3d稱量一次。2.6.3一般不做病理組織學(xué)檢查和生化指標(biāo)檢驗(yàn),但對(duì)死亡動(dòng)物應(yīng)做大體病理學(xué)觀察。如24h以上的存活動(dòng)
5、物,肉眼檢查有病變時(shí)應(yīng)做病理組織學(xué)檢查。2.7結(jié)果評(píng)定2.7.1用統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算LD50值。計(jì)算方法見(jiàn)附錄A(補(bǔ)充件)。2.7.2按農(nóng)藥的急性經(jīng)口毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定(見(jiàn)表1)。表1急性經(jīng)口毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別經(jīng)口LD50,mg/kg劇毒高毒中毒<55-505低毒0-500>5003急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)3.1目的了解農(nóng)藥對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物皮膚直接接觸引起局部皮膚損傷、全身中毒的特征等毒性效應(yīng),求出半數(shù)致死劑量(LD50),為制定農(nóng)藥生產(chǎn)和應(yīng)用中的防護(hù)措施提供依據(jù)。3.2試驗(yàn)農(nóng)藥原藥和制劑。3.3試驗(yàn)動(dòng)物3.3.1為有足夠的涂藥面積,首選成年大鼠,
6、體重要求200-300g。3.3.2各劑量組大鼠8~10只(雌雄各半)。3.4劑量分組3.4.1至少應(yīng)設(shè)4個(gè)劑量組,各劑量組應(yīng)有一定的間距,使給藥組能出現(xiàn)毒性表現(xiàn)和死亡。3.4.2如果2000mg/kg劑量仍不出現(xiàn)死亡時(shí),則不需要再進(jìn)行高劑量試驗(yàn)。3.5給藥方法及觀察時(shí)間3.5.1給藥前24h背部去毛,注意勿損傷皮膚,涂藥面積應(yīng)占體表面積10%,大鼠4×5cm^2,兔12×14cm^2,豚鼠7×10cm^2。3.5.2液體農(nóng)藥用原藥液,粉末農(nóng)藥用水或溶劑稀釋。3.5.3先將動(dòng)物固定,在略小于剃毛面積內(nèi)進(jìn)行定量敷藥,然后覆蓋一個(gè)與
7、脫毛面積相當(dāng)?shù)暮惺秸?,再用膠布固定。以防止動(dòng)物舔食試驗(yàn)藥品。3.5.4涂藥持續(xù)時(shí)間為4h。3.5.5涂藥4h后取下罩盒,用溫水洗去皮膚上的試驗(yàn)農(nóng)藥,再進(jìn)行局部觀察。3.5.6觀察時(shí)間為2周。3.6觀察指標(biāo)3.6.1中毒的臨床表現(xiàn),參照2.6.1。3.6.2死亡時(shí)間及死亡率。3.7結(jié)果評(píng)定3.7.1用統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算LD50值。計(jì)算方法見(jiàn)附錄A(補(bǔ)充件)。3.7.2按農(nóng)藥的急性經(jīng)皮毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定(見(jiàn)表2)。表1急性經(jīng)皮毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別經(jīng)皮LD50(4h),mg/kg劇毒高毒中毒低毒<2020-200200-2000>20004急
8、性吸入毒性試驗(yàn)4.1目的測(cè)試可能經(jīng)呼吸道進(jìn)入機(jī)體的農(nóng)藥(尤其是揮發(fā)性強(qiáng)的農(nóng)藥)對(duì)呼吸道及全身的損傷及其危害程度。求出吸入接觸的半數(shù)致死濃度(LC50),為農(nóng)藥的安全評(píng)價(jià)和制定生產(chǎn)應(yīng)用中的防護(hù)措施提供依據(jù)。4.2試驗(yàn)農(nóng)藥原藥和制劑。4.3試驗(yàn)動(dòng)物4.3.1一種以上