農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法

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1、窗體頂部中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB15670-1995農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法ToxicologicaltestmethodsofPesticidesforregistration1主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)的方法、條件的基本要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于為農(nóng)藥登記而進(jìn)行的毒理學(xué)試驗(yàn)。2急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)2．1目的求出試驗(yàn)農(nóng)藥對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的半數(shù)致死劑量（LD50）；通過(guò)觀察急性毒性效應(yīng)的臨床表現(xiàn)，初步估測(cè)毒作用的靶器官和可能的毒作用機(jī)理；為亞慢性、慢性和其他毒性試驗(yàn)的劑量水平設(shè)計(jì)提供參考；為急性毒性分級(jí)和制定安全防護(hù)措施提供

2、依據(jù)。2．2試驗(yàn)農(nóng)藥原藥和制劑。2．3試驗(yàn)動(dòng)物2．3．1主要選用品系、遺傳背景明確的初年大鼠。各劑量組內(nèi)同性別動(dòng)物體重差異應(yīng)小于平均體重的10%，組間同性別動(dòng)物體重均值差異應(yīng)小于5%。2．3．2每一劑量組的大鼠8~10只（雌雄各半），試驗(yàn)前要對(duì)動(dòng)物觀察一周，確認(rèn)健康后，方可使用。2．4劑量分組2．4．1至少應(yīng)設(shè)4~5個(gè)劑量組，各劑量組之間要有適當(dāng)?shù)膭┝块g距。以便各組出現(xiàn)不同程度的毒性效應(yīng)（死亡率），求得劑量效應(yīng)曲線及LD50。2．4．2如劑量達(dá)5000mg/kg體重以上，動(dòng)物仍不出現(xiàn)死亡，則不需要進(jìn)行更高劑量的試驗(yàn)。2．5給藥方

3、法及觀察時(shí)間2．5．1動(dòng)物給藥前應(yīng)隔夜禁食但不禁水，稱重后，一次灌胃給藥，給藥后至少間隔2h進(jìn)食。2．5．2灌胃量大鼠按100g體重給1mL，小鼠按20g體重給0.4mL計(jì)算，灌胃可用水溶液、油溶液或懸液。2．5．3給藥后立即觀察并記錄動(dòng)物的中毒表現(xiàn)，癥狀出現(xiàn)和消失的時(shí)間及死亡時(shí)間。給藥當(dāng)日應(yīng)連續(xù)觀察，其后，每日至少觀察2次，觀察期為14d。如在給藥96h后出現(xiàn)遲發(fā)性新效應(yīng)，則應(yīng)延長(zhǎng)觀察期至3周或4周。2．6觀察指標(biāo)2．6．1中毒癥狀全面觀察中毒的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程和規(guī)律以及中毒特點(diǎn)和毒作用的靶器官。觀察的系統(tǒng)包括：a．中樞神經(jīng)系統(tǒng)

4、和神經(jīng)肌肉系統(tǒng)：體位異常、叫聲異常、不安、呆滯、痙攣、抽搐麻痹、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、對(duì)外反應(yīng)過(guò)敏或遲鈍；b．植物神經(jīng)系統(tǒng)：瞳孔擴(kuò)大或縮小、流涎或流淚；c．呼吸系統(tǒng)：鼻孔流液、鼻翼煽動(dòng)、呼吸深緩、呼吸過(guò)速、蜂腰；d．泌尿生殖系統(tǒng)：會(huì)陰部污穢、有分泌物、陰道或乳房腫脹；e．皮膚和毛：皮膚充血、紫紺、被毛蓬松、污穢；f．眼：眼球突出、結(jié)膜充血、角膜混濁；g．消化系統(tǒng)：腹泄、厭食。2．6．2體重給藥前、死亡時(shí)各稱量一次體重，觀察期間每3d稱量一次。2．6．3一般不做病理組織學(xué)檢查和生化指標(biāo)檢驗(yàn)，但對(duì)死亡動(dòng)物應(yīng)做大體病理學(xué)觀察。如24h以上的存活動(dòng)

5、物，肉眼檢查有病變時(shí)應(yīng)做病理組織學(xué)檢查。2．7結(jié)果評(píng)定2．7．1用統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算LD50值。計(jì)算方法見(jiàn)附錄A（補(bǔ)充件）。2．7．2按農(nóng)藥的急性經(jīng)口毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定（見(jiàn)表1）。表1急性經(jīng)口毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別經(jīng)口LD50,mg/kg劇毒高毒中毒<55-505低毒0-500>5003急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)3.1目的了解農(nóng)藥對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物皮膚直接接觸引起局部皮膚損傷、全身中毒的特征等毒性效應(yīng)，求出半數(shù)致死劑量（LD50），為制定農(nóng)藥生產(chǎn)和應(yīng)用中的防護(hù)措施提供依據(jù)。3．2試驗(yàn)農(nóng)藥原藥和制劑。3．3試驗(yàn)動(dòng)物3．3．1為有足夠的涂藥面積，首選成年大鼠，

6、體重要求200-300g。3．3．2各劑量組大鼠8~10只（雌雄各半）。3．4劑量分組3．4．1至少應(yīng)設(shè)4個(gè)劑量組，各劑量組應(yīng)有一定的間距，使給藥組能出現(xiàn)毒性表現(xiàn)和死亡。3．4．2如果2000mg/kg劑量仍不出現(xiàn)死亡時(shí)，則不需要再進(jìn)行高劑量試驗(yàn)。3．5給藥方法及觀察時(shí)間3．5．1給藥前24h背部去毛，注意勿損傷皮膚，涂藥面積應(yīng)占體表面積10%，大鼠4×5cm^2，兔12×14cm^2，豚鼠7×10cm^2。3．5．2液體農(nóng)藥用原藥液，粉末農(nóng)藥用水或溶劑稀釋。3．5．3先將動(dòng)物固定，在略小于剃毛面積內(nèi)進(jìn)行定量敷藥，然后覆蓋一個(gè)與

7、脫毛面積相當(dāng)?shù)暮惺秸?，再用膠布固定。以防止動(dòng)物舔食試驗(yàn)藥品。3．5．4涂藥持續(xù)時(shí)間為4h。3．5．5涂藥4h后取下罩盒，用溫水洗去皮膚上的試驗(yàn)農(nóng)藥，再進(jìn)行局部觀察。3．5．6觀察時(shí)間為2周。3．6觀察指標(biāo)3．6．1中毒的臨床表現(xiàn)，參照2.6.1。3．6．2死亡時(shí)間及死亡率。3．7結(jié)果評(píng)定3．7．1用統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算LD50值。計(jì)算方法見(jiàn)附錄A（補(bǔ)充件）。3．7．2按農(nóng)藥的急性經(jīng)皮毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定（見(jiàn)表2）。表1急性經(jīng)皮毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別經(jīng)皮LD50(4h),mg/kg劇毒高毒中毒低毒<2020-200200-2000>20004急

8、性吸入毒性試驗(yàn)4．1目的測(cè)試可能經(jīng)呼吸道進(jìn)入機(jī)體的農(nóng)藥（尤其是揮發(fā)性強(qiáng)的農(nóng)藥）對(duì)呼吸道及全身的損傷及其危害程度。求出吸入接觸的半數(shù)致死濃度（LC50），為農(nóng)藥的安全評(píng)價(jià)和制定生產(chǎn)應(yīng)用中的防護(hù)措施提供依據(jù)。4．2試驗(yàn)農(nóng)藥原藥和制劑。4．3試驗(yàn)動(dòng)物4．3．1一種以上