細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)操作

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1、1.什么是細(xì)胞工程細(xì)胞工程按照一定的設(shè)計(jì)方案，通過(guò)在細(xì)胞、亞細(xì)胞或組織水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，獲得重構(gòu)的細(xì)胞、組織、器官以及個(gè)體，創(chuàng)造優(yōu)良品種和產(chǎn)品的綜合性生物工程。細(xì)胞工程所涉及的范圍很廣，按生物類型可以分為動(dòng)物細(xì)胞工程、植物細(xì)胞工程和微生物細(xì)胞工程，按實(shí)驗(yàn)操作對(duì)象可以分為細(xì)胞與組織培養(yǎng)、動(dòng)物融合、細(xì)胞核移植、染色體操作、轉(zhuǎn)基因生物等。以細(xì)胞工程為基礎(chǔ)，發(fā)展派生出了不少以工程冠名的新領(lǐng)域，如組織工程、胚胎工程、染色體工程等。2.什么是消毒disinfection是指殺滅或去除外環(huán)境中媒介物攜帶的病源微生物的過(guò)程。3.什么是干細(xì)胞stemcell干細(xì)胞是指具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞。

2、4.什么是細(xì)胞融合cellfusion又稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞融合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。5.什么是細(xì)胞培養(yǎng)cellculture是指生物細(xì)胞在離體條件下的生長(zhǎng)和增殖，細(xì)胞的離體培養(yǎng)稱為細(xì)胞培養(yǎng)。6.基因治療genetherapy指將外源功能性目的基因?qū)牖颊唧w內(nèi)，通過(guò)調(diào)控目的基因表達(dá)，抑制、替代或補(bǔ)償缺陷基因，從而恢復(fù)受累細(xì)胞、組織或器官的生理功能，達(dá)到疾病治療目的。7.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物transgenicanimal借助基因工程技術(shù)將外源基因?qū)胧荏w動(dòng)物染色體內(nèi)，外源基因與動(dòng)物基因整合后歲細(xì)胞的分裂而擴(kuò)增，在體內(nèi)表達(dá)并能穩(wěn)定的遺傳給后代的動(dòng)物。8.ES細(xì)胞embryonic

3、stemcell當(dāng)細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞分離出來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)，在一定條件下這些細(xì)胞可在體外“無(wú)限期”地增殖傳代，同時(shí)還保持其全能性。這種干細(xì)胞稱為胚胎干細(xì)胞即ES細(xì)胞。他是一種高度未分化細(xì)胞，具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官，包括生殖細(xì)胞。9.什么是克隆clone克隆是指生物體通過(guò)體細(xì)胞進(jìn)行的無(wú)性繁殖，以及由無(wú)性繁殖形成的基因型完全相同的后代個(gè)體組成的種群。10.什么是染色體Chromosome染色體是細(xì)胞內(nèi)具有遺傳性質(zhì)的物體,易被堿性染料染成深色,所以叫染色體(染色質(zhì)),其本質(zhì)是脫氧核甘酸.11.什么是細(xì)胞污染cellcontamination在細(xì)胞培養(yǎng)中，凡是與培養(yǎng)無(wú)關(guān)的雜

4、質(zhì)的混入培養(yǎng)系統(tǒng)稱為污染二、簡(jiǎn)答題1.重組DNA技術(shù)的一般步驟（1）目的基因的獲取　　目前，獲取目的基因的方法主要有三種：反向轉(zhuǎn)錄法、從細(xì)胞基因組直接分離法和人工合成法?！。?）DNA分子的體外重組　　體外重組是把載體與目的基因進(jìn)行連接。（3）DNA重組體的導(dǎo)入把目的基因裝在載體上后，就需要把它引入到受體細(xì)胞中。導(dǎo)入的方式有多種，主要包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、顯微注射、微粒轟擊和電擊穿孔等方式。轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)主要適用于細(xì)菌一類的原核生物細(xì)胞和酵母這樣的低等真核生物細(xì)胞，其他方式主要應(yīng)用于高等動(dòng)植物的細(xì)胞。（4）受體細(xì)胞的篩選與鑒定由于DNA重組體的轉(zhuǎn)化成功率不是太高，因而，需要在眾多的細(xì)胞中把成

5、功轉(zhuǎn)入DNA重組體的細(xì)胞挑選出來(lái)。應(yīng)事先找到特定的標(biāo)志，證明導(dǎo)入是否成功。（5）基因表達(dá)目的基因在成功導(dǎo)入受體細(xì)胞后，它所攜帶的遺傳信息必須要通過(guò)合成新的蛋白質(zhì)才能表現(xiàn)出來(lái)，從而改變受體細(xì)胞的遺傳性狀。目的基因在受體細(xì)胞中要表達(dá)，需要滿足一些條件。2、細(xì)胞融合一般采用哪幾個(gè)方法，一般經(jīng)歷哪幾個(gè)步驟方法：誘導(dǎo)細(xì)胞融合的主要方法有：病毒誘導(dǎo)融合，化學(xué)融合劑誘導(dǎo)融合和電融合。1.病毒誘導(dǎo)融合：病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的過(guò)程有：首先是細(xì)胞表面吸附許多病毒粒子，接著細(xì)胞發(fā)生凝集，幾分鐘至幾十分鐘后，病毒粒子從細(xì)胞表面消失，而就在這個(gè)部位鄰接的細(xì)胞的細(xì)胞膜融合，胞漿相互交流，最后形成融合細(xì)胞。2.化學(xué)

6、融合劑誘導(dǎo)融合：化學(xué)融合劑主要有高級(jí)脂肪酸衍生物、脂質(zhì)體、鈣離子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白質(zhì)和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。PEG用于細(xì)胞融合至少有兩方面的作用：①可促使細(xì)胞凝結(jié)；②破壞互相接觸處的細(xì)胞膜的磷脂雙分子層，從而使相互接觸的細(xì)胞膜之間發(fā)生融合，進(jìn)而細(xì)胞質(zhì)溝通，形成一個(gè)打的雙核或多核融合細(xì)胞。3.電融合：是指細(xì)胞在電場(chǎng)中極化成偶極子，并沿著電力線排列成串，然后用高強(qiáng)度、短時(shí)程的電脈沖擊穿細(xì)胞膜而導(dǎo)致細(xì)胞融合。步驟：以動(dòng)物細(xì)胞為例（1）細(xì)胞準(zhǔn)備。分貼壁和懸浮細(xì)胞兩種。前者可直接將兩親本細(xì)胞混合培養(yǎng)，后者需制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液?！　。?）細(xì)胞融合，加促融因

7、子于將行融合的細(xì)胞之中，誘導(dǎo)融合。　?。?）雜種細(xì)胞選擇。利用選擇性培養(yǎng)基等，使親本細(xì)胞死亡，而讓雜種細(xì)胞存活?！　。?）雜種細(xì)胞克隆。對(duì)選出的雜種細(xì)胞進(jìn)行克?。ㄟx擇與純化），經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，就能獲得所需要的無(wú)性繁殖誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動(dòng)，電刺激）。3、細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定方法MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其原理為活細(xì)胞的線粒體脫氫酶能使將染料MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物，并沉積