資源描述：
《多肽合成詳細解說》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、多肽合成詳細解說1．多肽化學合成概述： 1963年，R.B.Merrifield［1］創(chuàng)立了將氨基酸的C末端固定在不溶性樹脂上，然后在此樹脂上依次縮合氨基酸，延長肽鏈、合成蛋白質(zhì)的固相合成法，在固相法中，每步反應后只需簡單地洗滌樹脂，便可達到純化目的.克服了經(jīng)典液相合成法中的每一步產(chǎn)物都需純化的困難，為自動化合成肽奠定了基礎.為此，Merrifield獲得1984年諾貝爾化學獎. 今天，固相法得到了很大發(fā)展.除了Merrifield所建立的Boc法(Boc:叔丁氧羰基)之外，又發(fā)展了Fmoc固相法(Fmoc:9-芴甲氧羰基).以這兩種方法為基礎的各種肽自動合成儀
2、也相繼出現(xiàn)和發(fā)展，并仍在不斷得到改造和完善. Merrifield所建立的Boc合成法［2］是采用TFA(三氟乙酸)可脫除的Boc為α-氨基保護基，側鏈保護采用芐醇類.合成時將一個Boc－氨基酸衍生物共價交聯(lián)到樹脂上，用TFA脫除Boc，用三乙胺中和游離的氨基末端，然后通過Dcc活化、耦聯(lián)下一個氨基酸，最終脫保護多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法.用Boc法已成功地合成了許多生物大分子，如活性酶、生長因子、人工蛋白等.多肽是涉及生物體內(nèi)各種細胞功能的生物活性物質(zhì)。它是分子結構介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間的一類化合物,由多種氨基酸按照一定的排列順序通過肽鍵結合而成
3、。到現(xiàn)在，人們已發(fā)現(xiàn)和分離出一百多種存在于人體的肽，對于多肽的研究和利用，出現(xiàn)了一個空前的繁榮景象。多肽的全合成不僅具有很重要的理論意義，而且具有重要的應用價值。通過多肽全合成可以驗證一個新的多肽的結構；設計新的多肽，用于研究結構與功能的關系；為多肽生物合成反應機制提供重要信息；建立模型酶以及合成新的多肽藥物等?！《嚯牡幕瘜W合成技術無論是液相法還是固相法都已成熟。近幾十年來，固相法合成多肽更以其省時、省力、省料、便于計算機控制、便于普及推廣的突出優(yōu)勢而成為肽合成的常規(guī)方法并擴展到核苷酸合成等其它有機物領域。本文概述了固相合成的基本原理、實驗過程，對其現(xiàn)狀進行分析并
4、展望了今后的發(fā)展趨勢?！?963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來，經(jīng)過不斷的改進和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法無法比擬的優(yōu)點。其基本原理是：先將所要合成肽鏈的羥末端氨基酸的羥基以共價鍵的結構同一個不溶性的高分子樹脂相連，然后以此結合在固相載體上的氨基酸作為氨基組份經(jīng)過脫去氨基保護基并同過量的活化羧基組分反應，接長肽鏈。重復（縮合→洗滌→去保護→中和及洗滌→下一輪縮合）操作，達到所要合成的肽鏈長度，最后將肽鏈從樹脂上裂解下來，經(jīng)過純化等處理，即得所要的多肽。其中α-氨基用BOC（叔丁氧羰基）保
5、護的稱為BOC固相合成法，α-氨基用FMOC（9-芴甲氧羰基）保護的稱為FMOC固相合成法，2．固相合成的基本原理 多肽合成是一個重復添加氨基酸的過程，固相合成順序一般從C端（羧基端）向N端（氨基端）合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法?，F(xiàn)在多采用固相合成法，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。為了防止副反應的發(fā)生，參加反應的氨基酸的側鏈都是保護的。羧基端是游離的，并且在反應之前必須活化?；瘜W合成方法有兩種，即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢，現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成，如圖： 具體合成由下列幾個循環(huán)組成： 一、去保護：Fmo
6、c保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去除氨基的保護基團?！ 《?、激活和交聯(lián)：下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化?；罨膯误w與游離的氨基反應交聯(lián)，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應完成。循環(huán)：這兩步反應反復循環(huán)直到合成完成?！∪⑾疵摵兔摫Ｗo：多肽從柱上洗脫下來，其保護基團被一種脫保護劑（TFA）洗脫和脫保護。2.1樹脂的選擇及氨基酸的固定 將固相合成與其他技術分開來的最主要的特征是固相載體，能用于多肽合成的固相載體必須滿足如下要求：必須包含反應位點（或反應基團），以使肽鏈連在這些位點上，并在以后除去；必須對合成過程中的物理
7、和化學條件穩(wěn)定；載體必須允許在不斷增長的肽鏈和試劑之間快速的、不受阻礙的接觸；另外，載體必須允許提供足夠的連接點，以使每單位體積的載體給出有用產(chǎn)量的肽，并且必須盡量減少被載體束縛的肽鏈之間的相互作用。用于固相法合成多肽的高分子載體主要有三類：聚苯乙烯-苯二乙烯交聯(lián)樹脂、聚丙烯酰胺、聚乙烯-乙二醇類樹脂及衍生物，這些樹脂只有導入反應基團，才能直接連上（第一個）氨基酸。根據(jù)所導入反應基團的不同，又把這些樹脂及樹脂衍生物分為氯甲基樹脂、羧基樹脂、氨基樹脂或酰肼型樹脂。BOC合成法通常選擇氯甲基樹脂，如Merrifield樹脂；FMOC合成法通常選擇羧基樹脂如王氏樹脂。氨
8、基酸的固定
