大鼠載脂蛋白a1(apo-a1)elisa試劑盒說明書

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1、大鼠載脂蛋白A1(Apo-A1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書廈門慧嘉生物科技有限公司本試劑盒僅供研究使用檢測范圍：1.56μg/ml-100μg/ml最低檢測限：0.39μg/ml特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的大鼠Apo-A1，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。有效期：6個月預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定大鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中Apo-A1含量。說明1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶

2、。3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準(zhǔn)。4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。概述載脂蛋白A1(apoA1)是血漿高密度脂蛋白（HDL）中的主要多肽。apoA1基因的結(jié)構(gòu)和功能令人感興趣是因為在HDL水平和冠心病間顯示的負(fù)相關(guān)性。267個氨基酸的前體最初經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)與翻譯同時進(jìn)行的蛋白水解酶的切割成為前apoA-I。前apoA-I從細(xì)胞中分泌，在胸導(dǎo)管淋巴中以apoA-I1亞型被分離。apoA1存在于血漿，經(jīng)歷翻譯后蛋白酶水解加工

3、成熟為血漿apoA-I。實驗原理用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗Apo-A1抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗Apo-A1抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Apo-A1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1.酶聯(lián)板(Assayplate)：一塊（96孔）。2.標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶(凍干品)。3

4、.樣品稀釋液(SampleDiluent)：1×20ml/瓶。4.生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液?（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。9.濃洗滌液（Wash

5、Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10.終止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的試劑和器材1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀1.高速離心機(jī)2.電熱恒溫培養(yǎng)箱3.干凈的試管和Eppendof管4.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器6.蒸餾水，容量瓶等標(biāo)本的采集及保存1.血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血

6、漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。標(biāo)本的稀釋原則：首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。最后

7、計算濃度時，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為100μg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋100μg/ml，50μg/ml，25μg/ml，12.5μg/ml，6.25μg/ml，3.12μg/ml，1.56μg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0μg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制50μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）100μg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加

8、入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則：臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實