茶多酚大孔樹脂吸附分離性能的研究

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1、茶多酚大孔樹脂吸附分離性能的研究1材料與儀器1.1材料：茶葉(有限公司)(經(jīng)西北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物教研室鑒定);1.2試劑及藥品：茶多酚對(duì)照品(批號(hào)：，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供);大孔樹脂LX-X由西安藍(lán)曉科技開發(fā)有限公司提供。其它試劑均為分析純。1.3儀器：島津LC-20A型高效液相色譜系統(tǒng)：包括LC-20A型高壓恒流泵、SPD-20A檢測(cè)器和LCSolution工作站；UV-762紫外可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司);電熱恒溫水浴鍋(H·H·S21-6C，上海醫(yī)療器械五廠);電子分析天平(FC204，上

2、海精科實(shí)業(yè)有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器R502B(上海亞蓉生化儀器廠);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵；索式提取器；電熱鼓風(fēng)干燥箱;植物粉碎機(jī)(FZ102，天津市泰斯特儀器有限公司)；層析柱(40mm×50cm)。2方法2.1茶多酚的定性、定量檢測(cè)2.1.1茶多酚的薄層定性檢測(cè)硅膠薄板制作按1：3的比例稱取硅膠G和0.5%的CMC-NA，研磨約30min后，平鋪到10×20cm的洗凈烘干的玻璃平板上，鋪勻，隔夜，自然晾干。展開劑配制按氯仿：乙酸乙酯：正丁醇：甲酸=2：1.3：0.4：0.3的比例配置（約需80ml）層析活化薄板

3、：105℃，30min。點(diǎn)樣：所用液體為留取的待測(cè)液，點(diǎn)樣量為25uL。飽和：在層析缸內(nèi)扣放入一培養(yǎng)皿，再將薄板放在上面,板子不接觸層析液，在其蒸汽中飽和30min以上。層析：將板子放入展開劑中展開，待展開劑前沿距板子上端1.5cm取出，放入通風(fēng)廚晾干。結(jié)果觀察及分析:（肉眼觀察）2.1.2茶多酚的定量測(cè)定—酒石酸亞鐵分光光度法1利用茶葉中的多酚類物質(zhì)能與亞鐵離子形成藍(lán)色絡(luò)合物的性質(zhì)，將茶葉水提液及樹脂法、有機(jī)溶劑法所得產(chǎn)品配制成一定濃度的溶液，使其與酒石酸亞鐵溶液在一定的介質(zhì)條件中反應(yīng)生成藍(lán)色絡(luò)合物，通過(guò)測(cè)定絡(luò)合物的吸

4、光光度值，利用公式便可以算出茶葉及各產(chǎn)品中茶多分的含量。儀器及用具實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器及感量0.0001的分析天平、分光光度計(jì)2.1.2.1試劑和溶液1）酒石酸亞鐵溶液：準(zhǔn)確稱量0.500克硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）和2.500g酒石酸鉀鈉（C4H4O6KNa·4H2O），用水溶解并定容至500ml。（溶液低溫、避光保存，有效期一個(gè)月）2）PH=7.5的磷酸鹽緩沖液1/15M磷酸氫二鈉：稱取11.6885g磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O），用水溶解并定溶至500ml。1/15M磷酸二氫鉀：稱取4.5390g磷酸二

5、氫鉀（KH2PO4·12H2O），用水溶解并定溶至500ml。取上述1/5磷酸氫二鈉溶液85ml和1/15M磷酸二氫鉀溶液15ml，混勻即可。2.1.2.2操作方法試樣制備：稱取3g茶葉，研碎后，將其放置于500ml的錐形瓶中，加沸蒸餾水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min，浸提完畢后立即趁熱減壓過(guò)濾，濾液移入500ml容量瓶中，殘?jiān)蒙倭繜嵴麴s水洗滌2～3次，并將濾液移入上述容量瓶中，冷卻后用蒸餾水稀釋至刻度。稱取多酚產(chǎn)品各0.025g，用甲醇溶解并定容至25ml，溶液濃度為0.1%。測(cè)定步驟：a.吸取上述試樣

6、液各1ml，分別加入已標(biāo)號(hào)的25ml容量瓶中，然后各加入4ml水，5ml酒石酸亞鐵溶液，充分混勻后用PH=7.5磷酸鹽緩沖液定溶至計(jì)刻度線。b.不加試樣液，配制試劑空白溶液，以作參考。c.用10ml比色杯，在波長(zhǎng)540nm處測(cè)定各溶液的吸光度A。測(cè)定結(jié)果如表1：2.1.2.3結(jié)果計(jì)算茶葉及茶多酚產(chǎn)品中的茶多酚含量，以干物質(zhì)量百分率表示：計(jì)算公式為：A×1.957×2×L1茶多酚（%）=───────────×1001000×L2×M×m其中：L1——試劑的總量（ml）L2——測(cè)定時(shí)用液量（ml）M——試樣的質(zhì)量(g)m—

7、—試樣干物質(zhì)含量百分率（%）A——試樣的吸光度1.957——用10mm比色杯，當(dāng)吸光度等于0.50時(shí)，每毫升茶湯中茶多酚相當(dāng)于1.957mg。0.239×1.957×2×25茶多酚產(chǎn)品（%）=───────────×100%=93.54%1000×1×0.0252.1.2.4結(jié)果討論2.1.3茶多酚的定量測(cè)定—酒石酸亞鐵分光光度法21原理利用茶葉中的多酚類物質(zhì)能與亞鐵離子形成藍(lán)色絡(luò)合物的性質(zhì)，將茶葉水提液及三種提取法所得的產(chǎn)品配制成一定濃度的溶液，使其與酒石酸亞鐵溶液在一定的介質(zhì)條件中反應(yīng)生成藍(lán)色絡(luò)合物。通過(guò)測(cè)定此絡(luò)合物

8、的吸光度值，利用由沒(méi)食子酸乙醋作為對(duì)照品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線便可計(jì)算出茶葉及各產(chǎn)品中茶多酚的含量。根據(jù)茶多酚主要成份是表兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素類。兒茶素結(jié)構(gòu)的羥基在苯核上的位置不同，既有鄰苯二酚基，又有連苯三酚基，還有沒(méi)食子酸形成酯型結(jié)合物。而酒石酸亞鐵主要是與茶多酚中的鄰位羥基和連位羥基功能團(tuán)顯色，而對(duì)間位羥基和單羥基不