人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(tat)酶聯(lián)免疫分析

人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(tat)酶聯(lián)免疫分析

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1、人凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號(hào):CSB-E08431h檢測(cè)范圍:0.312ng/ml-20ng/ml最低檢測(cè)限:0.078ng/ml特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的人TAT,且與其他相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。有效期:6個(gè)月預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中TAT含量。說(shuō)明1.試劑盒保存:-20℃(較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí));2-8℃(頻繁使用時(shí))。2.濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。3.

2、中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處,請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。4.剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。實(shí)驗(yàn)原理用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗TAT抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗TAT抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TAT呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1

3、.酶聯(lián)板(Assayplate):一塊(96孔)。2.標(biāo)準(zhǔn)品(Standard):2瓶(凍干品)。3.樣品稀釋液(SampleDiluent):1×20ml/瓶。4.生物素標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibodyDiluent):1×10ml/瓶。5.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液?(HRP-avidinDiluent):1×10ml/瓶。6.生物素標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7.辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl

4、/瓶(1:100)8.底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。9.濃洗滌液(WashBuffer):1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10.終止液(StopSolution):1×10ml/瓶(2NH2SO4)。需要而未提供的試劑和器材1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀2.高速離心機(jī)3.電熱恒溫培養(yǎng)箱4.干凈的試管和Eppendof管5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),最好用多通道移液器6.蒸餾水,容量瓶等標(biāo)本的采集及保存1.血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于

5、1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。1.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本的稀釋原則:首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量,確定適

6、當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi),檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。最后計(jì)算濃度時(shí),稀釋了“N”倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為20ng/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋20ng/ml,10ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml,1.25ng/ml,0.625ng/ml,0.312ng/ml,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0ng/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配

7、制。如配制10ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml)20ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則:臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記抗體加990μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素

8、稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液?的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。操作步驟實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?

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