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《烏司他丁通過抑制腸黏膜細(xì)胞凋亡減輕大鼠腸道缺血》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、烏司他丁通過抑制腸黏膜細(xì)胞凋亡減輕大鼠腸道缺血【摘要】目的探討蛋白酶抑制劑烏司他丁(ulinastatin,UTI)對大鼠腸缺血再灌注損傷后腸黏膜屏障功能的保護(hù)作用及其機(jī)制?!》椒?4只成年雄性SD大鼠夾閉腸系膜上動脈1h,再灌注1h,隨機(jī)分為空白對照組、對照組和治療組。治療組于缺血后經(jīng)陰莖背靜脈緩慢泵入UTI(5萬單位/kg);對照組給予等量等滲鹽水;空白對照組僅做開關(guān)腹并給予等量生理鹽水作為對照。各組大鼠均于制模后采集標(biāo)本,動態(tài)濁度法檢測血清內(nèi)毒素含量,TUNEL法檢測腸黏膜上皮細(xì)胞凋亡率,RTPCR檢測凋亡調(diào)控基因Bax、Bcl2mRNA的
2、表達(dá)。結(jié)果空白對照組血清內(nèi)毒素水平和腸黏膜細(xì)胞凋亡指數(shù)均低于對照組(P<0.01);治療組BaxmRNA表達(dá)低于對照組(P<0.01),而Bcl2mRNA表達(dá)高于對照組(P<0.01)。結(jié)論烏司他丁可能通過抑制腸黏膜上皮細(xì)胞的凋亡,維持腸黏膜屏障的完整性,從而防止缺血再灌注損傷時細(xì)菌和內(nèi)毒素的移居?!娟P(guān)鍵詞】烏司他丁;腸缺血再灌注損傷;細(xì)胞凋亡;Bax;Bcl2 ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofulinastatinontheintestinalmucos
3、albarrierinratsiareperfusion.MethodsTotally24SDratslydividedinto3groupsafterclampingsuperiormesentericarteryfor1handreperfusionfor1h:blankcontrolgroup,controlgroupandtreatmentgroup.Ratsinthetreatmentgroupiareperfusionmodelyanipulationoftheintestineandthesamedoseofsalineeensiar
4、eperfusionmodelicturbidimetryucosalcellsethod,andtheexpressionsofBaxandBcl2mRNAinedbysemiquantitativeRTPCR. ResultsTheserumendotoxinlevelandapoptoticindexofmucosalcellsRNAinintestinalmucosalcellsentgroupthanincontrolgroup(P<0.01),buttheexpressionofBcl2mRNAentgroup(P<0.0
5、1). ConclusionUlinastatincanpreventthetranslocationofbacteriaandendotoxininischemiareperfusioninjurybyinhibitingtheapoptosisofintestinalmucosacellsandmaintainingtheintestinalbarrierfunction. KEYODS)?! ∧c黏膜上皮屏障功能的維持依賴于上皮細(xì)胞增殖與凋亡之間的平衡。I/R損傷和細(xì)菌感染等因素可促使黏膜上皮細(xì)胞凋亡明顯上調(diào),導(dǎo)致腸黏膜上皮屏障(IBF)功能障礙
6、。烏司他丁(ulinastatin,UTI)在治療胰腺炎及抗腫瘤、抗休克等方面的作用已受到重視[13],而其對抗腸I/R損傷的作用,尤其是其治療機(jī)制還沒有相關(guān)報道。本研究擬從細(xì)胞凋亡角度探討UTI對大鼠腸I/R的保護(hù)作用?! ?材料與方法 1.1材料健康成年雄性SD大鼠24只,體重250~300g,由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。烏司他丁(廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司);細(xì)胞凋亡原位檢測(TUNEL)試劑盒(華美生物工程公司);PCR試劑盒(Fermentas);引物由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成?! ?.2實(shí)驗(yàn)分組及模型制備24只成年雄性
7、健康SD大鼠,隨機(jī)分為空白對照組、對照組、烏司他丁治療組,每組8只。大鼠禁食12h,禁水4h,25g/L戊巴比妥鈉(1.2mg/kg)腹腔注射麻醉。采用腸系膜上動脈(superiormesentericartery,SMA)以夾閉松夾方式復(fù)制腸I/R模型,備皮消毒后取腹正中切口3~4cm,游離腸系膜上動脈,用無損傷血管夾夾閉其起始部1h,造成腸缺血模型。治療組于缺血后立即陰莖背靜脈泵輸注UTI(5萬單位/kg);對照組則輸注等量等滲鹽水,空白對照組僅于開腹翻動十二指腸后縫合腹壁并于陰莖背靜脈注射等量生理鹽水。大鼠均于再灌注后1h剖殺,取回腸末端距回盲部
8、1cm處的回腸組織,40g/L多聚甲醛溶液固定。 1.3動態(tài)濁度法檢測門靜脈血