丙泊酚對(duì)大鼠缺血再灌注腎nfκb、tnfα表

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1、丙泊酚對(duì)大鼠缺血再灌注腎NFκB、TNFα表【摘要】目的研究丙泊酚對(duì)大鼠肢體缺血再灌注損傷后腎組織中腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactorα，TNFα)、核因子κB(nuclearfactorκB，NFκB)表達(dá)的影響。方法24只SD雄性大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組(A組)，肢體缺血再灌注組(B組)和丙泊酚干預(yù)組(C組)，每組8只。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)TNFα、NFκB的表達(dá)，行圖像分析半定量。結(jié)果B組大鼠腎組織中TNFα、NFκB的表達(dá)明顯高于A組(P＜0.05)，C組明顯低于B組(P＜0.05)。結(jié)論肢體缺血

2、再灌注后有明顯腎損傷，丙泊酚對(duì)肢體缺血再灌注腎損傷有一定程度的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與下調(diào)大鼠肢體缺血再灌注損傷腎組織中TNFα、NFκB的過度表達(dá)有關(guān)?！　　娟P(guān)鍵詞】丙泊酚；腎；肢體缺血再灌注；腫瘤壞死因子α；核因子κB　　肢體缺血再灌注損傷是外科常見的病理生理過程，如止血帶使用時(shí)間過長(zhǎng)、創(chuàng)傷、斷指再植、血栓再通等都可以引起肢體缺血再灌注損傷。肢體缺血再灌注除了能引起相應(yīng)的肢體損傷，還可以通過神經(jīng)內(nèi)分泌免疫機(jī)制引發(fā)遠(yuǎn)隔臟器障礙及損傷。肢體缺血再灌注對(duì)相應(yīng)肢體損傷的研究已較成熟，但對(duì)于肢體缺血再灌注引起的遠(yuǎn)隔臟器腎損傷的研究卻較少見。本研究擬觀

3、察大鼠肢體缺血再灌注后腎組織中腫瘤壞死因子α(tumornecrosisfactorα，TNFα)、核因子κB(nuclearfactorκB，NFκB)的變化以及丙泊酚對(duì)其損傷的干預(yù)。　　1資料與方法　　1.1動(dòng)物模型制備實(shí)驗(yàn)前禁食12h，自由飲水，25％烏拉坦(1g/kg)腹腔注射，麻醉后氣管切開，接動(dòng)物呼吸機(jī)機(jī)械通氣(通氣頻率為75次/min，潮氣量為8mL，吸呼比為1∶2)，于腹股溝處解剖出雙側(cè)股動(dòng)脈，用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉，遠(yuǎn)端股動(dòng)脈置管測(cè)壓，血壓為零標(biāo)志缺血成功，保持下肢缺血3h后去除動(dòng)脈夾再灌注4h，恢復(fù)下肢血供，血壓升高標(biāo)志再灌注成

4、功?！　?.2分組及處理24只清潔級(jí)SD雄性大鼠(山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供)，體重(200±20)g，隨即分為三組，每組8只。假手術(shù)對(duì)照組(A組)：大鼠麻醉后僅分離不夾閉股動(dòng)脈；肢體缺血再灌注組(B組)：夾閉股動(dòng)脈缺血3h，再灌注4h；丙泊酚干預(yù)組(C組)：夾閉股動(dòng)脈前10min靜脈注射丙泊酚5mg/kg(AstraZeneca公司，英國(guó))，隨后以10mg/kg·h靜脈輸注，缺血再灌注同B組。再灌注完畢，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)心臟主動(dòng)脈插管灌注固定液〔4％多聚甲醛0.1mmol/L磷酸緩沖液(phosphatebuffersolution，PBS)配制〕后，處死大鼠

5、取腎，置于10％甲醛溶液中固定24h后常規(guī)石蠟包埋并切片，以備組織學(xué)檢查?！　?.3腎組織TNFα、NFκB的檢測(cè)選用鏈酶親和素過氧化物酶復(fù)合物即用型免疫組化試劑盒(武漢博士德)，按說明書操作，取石蠟片按程序脫蠟，3％H2O2滅活內(nèi)源性酶，微波抗原修復(fù)10min，5％牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA)封閉，分別加免抗TNFα多克隆抗體(武漢博士德)I抗、免抗NFκBp65多克隆抗體(武漢博士德)I抗，稀釋度為1∶80，冰箱過夜后加山羊抗鼠免疫球蛋白G，加酶標(biāo)記物，DAB顯色，光鏡下觀察。應(yīng)用Laica圖像分析系統(tǒng)，光鏡

6、放大400倍攝取圖像，輸入圖像分析系統(tǒng)。每張切片隨機(jī)選取60個(gè)區(qū)域，計(jì)算每張切片的平均光度，陽性單位。　　1.4統(tǒng)計(jì)分析計(jì)量數(shù)據(jù)以(±s)表示，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS12.0行方差分析和q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。　　2結(jié)果　　2.1腎組織病理學(xué)觀察光鏡下，A組無明顯病理學(xué)改變，B組可見腎小球腫大，球囊上皮細(xì)胞腫脹，囊壁水腫，囊腔變小。間質(zhì)內(nèi)少量中性白細(xì)胞浸潤(rùn)，血管內(nèi)白細(xì)胞聚集，靠邊。C組腫大腎小球明顯減少，囊壁水腫亦減輕，囊腔較B組變大。A組腎組織有較少量的TNFα、NFκB的蛋白表達(dá)，B組腎組織中TNFα、NFκB的表達(dá)比A組顯著上

7、調(diào)(P＜0.05)，但C組大鼠腎組織中TNFα、NFκB表達(dá)明顯低于B組(P＜0.05)(見表1)。光鏡下觀察各組蛋白表達(dá)變化，見圖1～4。　　表1各組大鼠腎組織TNFα、NFκB的表達(dá)(略)　　圖1－　圖4略　　3討論　　　　缺血再灌注損傷是常見的病理生理過程，越來越受到重視和研究。肢體缺血再灌注損傷的機(jī)理極為復(fù)雜：無復(fù)流導(dǎo)致一系列細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能障礙；鈣超載導(dǎo)致離子交換變化，能量代謝障礙；中性粒細(xì)胞活化引發(fā)“呼吸爆發(fā)”，產(chǎn)生并釋放大量自由基和一些促炎癥細(xì)胞因子，如NFκB、TNFα等，造成組織損傷和血管通透性增加；以及自由基損傷作用等，從而

8、引起全身炎癥反應(yīng)。TNFα是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，主要于單核細(xì)胞和