聯(lián)合轉(zhuǎn)染survivin和bcl2反義寡核苷酸對

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1、聯(lián)合轉(zhuǎn)染Survivin和Bcl2反義寡核苷酸對【摘要】目的探討聯(lián)合轉(zhuǎn)染Survivin和Bcl2反義寡核苷酸（AsODN）對裸鼠膽囊癌生長抑制作用。方法建立裸鼠膽囊癌皮下移植瘤模型，選擇36只裸鼠隨機(jī)分為3組：對照組、正義寡核苷酸（sODN）組和AsODN組，裸鼠瘤體內(nèi)分別注射PBS、Survivin和Bcl2sODN、Survivin和Bcl2AsODN，12d后處死裸鼠，測量瘤體體積及質(zhì)量，計(jì)算抑瘤率；蘇木精伊紅染色觀察瘤體組織學(xué)變化；免疫組織化學(xué)方法檢測Survivin及Bcl2蛋白的表達(dá)。結(jié)果AsODN組裸鼠瘤體平均體積顯著低于對照組

2、、sODN組（F=24.469，q=8.802、7.569，P<0.01），其體積抑瘤率為55.53%，sODN組為9.90%；AsODN組裸鼠瘤體平均質(zhì)量顯著低于對照組、sODN組（F=25.376，q=3.168、20.737，P<0.01），其質(zhì)量抑瘤率為56.24%，sODN組為8.47%。AsODN組瘤體中可見大量的凋亡細(xì)胞。免疫組化證實(shí)AsODN組Survivin表達(dá)明顯降低，同sODN組相比差異有顯著意義（F=15.103，q=5.883、7.191，P<0.01）；Bcl2表達(dá)亦明顯降低，同sODN組相比差異有顯著性（

3、F=6.632，q=4.793、4.030，P<0.05）。結(jié)論聯(lián)合轉(zhuǎn)染Survivin和Bcl2AsODN可下調(diào)Survivin和Bcl2表達(dá)，誘發(fā)細(xì)胞凋亡，從而抑制裸鼠膽囊癌種植瘤的生長?！娟P(guān)鍵詞】膽囊腫瘤寡核苷酸反義SurvivinBcl2模型動(dòng)物［ABSTRACT］ObjectiveToevaluatetheinhibitoryactionofbiningantisenseoligonucleotidetargetingSurvivinandBcl2ongroainnudemouse.MethodsAmodelofhumangall

4、bladdercarcinomatransplantedsubcutaneouslyinnudemiceiceeofthetumoreasuredandhistologyobservedbyHEstaining,theexpressionofsurvivinandBcl2proteindetectedbyimmunohistochemistrySABCmethod.ResultsThemeanvolumeandorsofAsODNgroupeandarkedlyloorsinnudemice,thereasonmightbethattheycouldd

5、oacell.［KEYI1640培養(yǎng)液及小牛血清購自杭州四季青公司。兔抗人Survivin多克隆抗體、兔抗人Bcl2多克隆抗體、SABC及DAB顯色試劑盒均購自武漢博士德生物工程公司。1.1.3細(xì)胞株膽囊癌細(xì)胞株GBCSD系山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科構(gòu)建。1.1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BALB/cnu/nu裸小鼠，4～6周齡，雌雄兼用，體質(zhì)量18～23g，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1裸小鼠膽囊癌模型的建立取處于對數(shù)生長期1×1010/L的GBCSD膽囊癌細(xì)胞，于每只裸鼠一側(cè)背部皮下接種0.2mL單細(xì)胞懸液，以皮下結(jié)節(jié)直徑超過0.5c

6、m為成瘤標(biāo)準(zhǔn)。所有裸鼠于接種細(xì)胞后2周左右成瘤，成瘤率100％。1.2.2抑制種植瘤實(shí)驗(yàn)取成瘤后裸鼠36只，稱體質(zhì)量后隨機(jī)分為3組，每組12只。對照組每只裸鼠瘤體內(nèi)多點(diǎn)注射PBS0.3mL，sODN組每只裸鼠瘤體內(nèi)多點(diǎn)注射50μL脂質(zhì)體(Lipofectin)+SurvivinsODN及Bcl2sODN各100μg（0.3mL），AsODN組每只裸鼠瘤體內(nèi)均行多點(diǎn)注射50μL的Lipofectin＋SurvivinAsODN及Bcl2AsODN各100μg（0.3mL），每天注射1次。于注射后12d斷頸處死裸鼠，剝離腫瘤，分別測量腫瘤長軸（L）、短軸

7、（ax×100%。其中Gα為切片中所測內(nèi)容的平均灰度，Gβ為切片中的背景灰度，Gmax為最大灰度值。1.2.5細(xì)胞組織學(xué)觀察組織切片采用蘇木精伊紅染色方法染色。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS11.5forWindoRNA的表達(dá),并可見胃癌細(xì)胞出現(xiàn)凋亡特征性改變。殺死和清除腫瘤細(xì)胞是治療腫瘤的基本手段，由于細(xì)胞凋亡失衡是腫瘤形成及發(fā)展的重要原因，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡無疑是治療腫瘤的一條有效途徑。與抑制或殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對健康組織帶來損傷的治療方法相比，腫瘤細(xì)胞凋亡療法可能會有效而無副作用。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多基因、多因素共同作用的結(jié)果，在不同的發(fā)展階段，不同的

8、癌基因或抑癌基因的數(shù)目、種類、作用方式各不相同，僅針對單一基因治療的AsODN不