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《聯(lián)合轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸survivin和vegf抑制肺癌a549細(xì)胞生長的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、碩士專業(yè)學(xué)位論文論文題目聯(lián)合轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸Survivin和VEGF抑制肺癌A549細(xì)胞生長的研究顏潔研究生姓名朱雪明指導(dǎo)教師姓名臨床檢驗診斷學(xué)專業(yè)名稱腫瘤分子生物學(xué)研究方向2013年6月論文提交日期聯(lián)合轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸Survivin和VEGF抑制肺癌A549細(xì)胞生長的研究中文摘要聯(lián)合轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸Survivin和VEGF抑制肺癌A549細(xì)胞生長的研究中文摘要目的：本實驗針對Survivin和VEGFmRNA序列設(shè)計反義寡核苷酸（ASODN），以脂質(zhì)體（Lip）為載體，應(yīng)用Survivin和VEGFASODN聯(lián)合轉(zhuǎn)染非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞株，探討同時抑制Survivin和V
2、EGF兩個基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞增殖、凋亡以及基因表達(dá)的影響，為非小細(xì)胞肺癌雙靶點基因治療提供實驗依據(jù)。方法：①將實驗分為7組，Blank組：A549細(xì)胞；Lip組：Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞；SurvivinSODN組；VEGFSODN組；SurvivinASODN；VEGFASODN；Survivin+VEGF組：SurvivinASODN和VEGFASODN聯(lián)合轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞。②利用反義寡核苷酸技術(shù)，以脂質(zhì)體（Lip）為載體，分別介導(dǎo)200、400、600nmol/LSurvivinASODN和5、10、20μmol/LVEGFASODN單獨轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，
3、鏡下觀察轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞形態(tài)變化，轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h后，MTT法檢測細(xì)胞生長抑制率，RT-PCR測定細(xì)胞中Survivin和VEGF基因mRNA表達(dá)。③用脂質(zhì)體介導(dǎo)400nmol/LSurvivinASODN和10μmol/LVEGFASODN聯(lián)合轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，48h后觀察聯(lián)合轉(zhuǎn)染組細(xì)胞形態(tài)變化，MTT檢測細(xì)胞增殖情況，RT-PCR檢測Survivin和VEGFmRNA表達(dá)，流式細(xì)胞儀（FCM）檢測細(xì)胞凋亡和Survivin蛋白表達(dá)。結(jié)果：①顯微鏡下Blank組、Lip組、SODN組細(xì)胞形態(tài)完整、貼壁良好，ASODN組細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則、生長減慢，Survivin+VEG
4、F組細(xì)胞皺縮、成簇狀漂?。虎贛TT結(jié)果顯示A549細(xì)胞分別經(jīng)200、400、600nmol/LSurvivinASODN和5、10、20μmol/LVEGFASODN轉(zhuǎn)染，孵育24h，48h，72h，96h后細(xì)胞生長出現(xiàn)不同程度的抑制，與Blank組、Lip組、SODN組相比，細(xì)胞增殖抑制率顯著升高（P<0.05）；且SurvivinASODN和VEGFASODN抑制作用均在48h達(dá)到高峰，隨孵育時間增加，抑制作用逐漸減弱；③ASODN組抑制作用呈劑量依賴性，其中SurvivinASODN在400nmol/L濃度處出現(xiàn)明顯的抑制效果，細(xì)胞增殖抑制率為（49.24±1.15）%，與20
5、0nmol/LI中文摘要聯(lián)合轉(zhuǎn)染反義寡核苷酸Survivin和VEGF抑制肺癌A549細(xì)胞生長的研究（39.54±1.93）%相比顯著增高（P<0.05），mRNA相對含量明顯降低（P<0.05）；VEGFASODN在10μmol/L濃度處出現(xiàn)明顯的抑制效應(yīng)，抑制率為（39.54±1.44）%，抑制作用比濃度為5μmol/L（27.47±1.30）%時明顯增強，mRNA表達(dá)也顯著降低，兩者差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；④400nmol/LSurvivinASODN和10μmol/LVEGFASODN轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞48h后，Survivin+VEGF組的細(xì)胞生長抑制率為（61
6、.37±1.94）%，較單獨轉(zhuǎn)染SurvivinASODN（50.44±1.13）%和VEGFASODN（39.33±1.99）%的抑制效果明顯增加(P＜0.05)；⑤AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記細(xì)胞后流式細(xì)胞儀檢測Survivin+VEGF組A549細(xì)胞凋亡率為（57.03±1.61）%，顯著高于SurvivinASODN（22.33±2.41）%和VEGFASODN（18.28±1.13）%單獨轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；⑥RT-PCR結(jié)果顯示Survivin+VEGF組SurvivinmRNA和VEGFmRNA相對含量分別為（15.26±1.31）%和
7、（13.12±1.45）%，較Blank組、Lip組、SODN組、ASODN組顯著降低（P<0.01），ASODN組中單個基因被抑制，另一基因mRNA表達(dá)也出現(xiàn)下調(diào)；⑦流式檢測Survivin蛋白表達(dá)率，Survivin+VEGF組為（30.40±1.33）%、SurvivinASODN組為（41.41±1.19）%、VEGFASODN組為（46.84±1.72）%，雙基因ASODN聯(lián)合轉(zhuǎn)染對Survivin蛋白表達(dá)的抑制強度明顯高于單獨轉(zhuǎn)染組（P<0.0
