Survivin反義寡核苷酸抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究

Survivin反義寡核苷酸抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究

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1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Survivin反義寡核苷酸抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究姓名:魯蕾申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):消化內(nèi)科指導(dǎo)教師:呂宗舜20030601天f牡醫(yī)科大學(xué)硬{:研究生學(xué)位'電文FBSDMSoEC}1’AMTTPBSR孫舡1640ODDDP5.FUIC50PIASODNSODNODNIRA】FCMcDNART-PCPL嬸B(yǎng)IR英文縮略語(Ab眥viation)fbtaIbovinesofadimethylsulphosideethylenediamineteraaceticacid(3一(4,5·dimethylt

2、hiazol-yl一)2,5一diphenylterazolimbromidethiazolylbluephosphatebalancedsaltsolutionopticaldensityeisplatinfluorouracilinhibitoryeoncentritionpropidiumiodideantis.enseoligonueleotidesenseoligonucleotideoligonueleotiderateofinhibitionindexofapoptosisfloweytometercomplementar

3、yDNAreversetranscriptionpolymerasechainreactioninhibitorofapoptosisproteinbaeulovirusIAPrepeat1胎牛血消二甲基亞礬乙二胺四乙酸四甲基偶氮唑藍(lán)磷酸鹽緩沖液一種合成培養(yǎng)基光密度順鉑氟脲嘧啶50%半數(shù)有效濃度碘化丙啶反義寡核苷酸正義寡核苷酸寡核苷酸抑制率凋亡指數(shù)流式細(xì)胞儀互補(bǔ)DNA逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)凋亡抑制蛋白桿狀病毒lAP重復(fù)序列天津醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Apaf-IEPR.1CaspaSeAPCSMACFDAapoptosisactiving

4、factor-1凋亡促進(jìn)因子effctorcellproteasereceptor-I效應(yīng)務(wù)毗Kg蛋白酶受體一1半胱氨酸蛋白酶adeomatouspolyposiscoil結(jié)腸腺瘸息肉病摯因secord而Ddlor凼捌釃帕d舳of線粒體來源的半胱氨酸caspase蛋白酶二級活化物Foodanddrugadministration美國食品和藥物管理局2天津醫(yī)科太學(xué)頸士研究生學(xué)位.電文Survivin反義寡核苷酸抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究摘要背景:腫熄是威脅我國人民健康的鬻見病、多發(fā)病。消化邀腫瘸在我國惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率中均

5、居于首位,其中結(jié)直腸癌在我國的發(fā)病率目前呈逐年上升趨勢,傳統(tǒng)的治療方法效果欠佳,如何有效的治療結(jié)腸癌已成為學(xué)者專家們研究的重點。Smvivm是近年來發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋自家族的新成員,它可以抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡,在近乎所有的惡性腫瘤中具有豐富的表達(dá),而在正常組織中不表達(dá)。根據(jù)這一特性與之相關(guān)的腫瘤基因治療成為當(dāng)今研究的熱點。目的:探討研究survivin反義寡核苷酸對結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29的增殖,凋亡的影響,以及與化療藥的協(xié)同作用。方法:將不同濃度的survivin反義寡核苷酸(antisenseoligonucleotideASODN)轉(zhuǎn)染

6、結(jié)腸癌細(xì)胞HT.29,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,用MTF法檢測其對腫瘤細(xì)胞的抑制率(瓜),流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡的變化情況,免疫組化法檢測ASODN轉(zhuǎn)染前后survivin蛋白的表達(dá)情況,并將其與順鉑(DD甲>和氟脲嘧啶(5.Fu)聯(lián)合應(yīng)用,觀察AsoDlN與化療藥是否具有瓠同作用。結(jié)果:SurvivinASODN在終濃度400nmol/L時,對細(xì)胞的抑制作用明顯,相差顯微鏡下觀察,結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29細(xì)胞經(jīng)ASODN轉(zhuǎn)染后變天津醫(yī)科大學(xué)碩{:研究生學(xué)位論文圓.漂浮,碎片形成,MTT檢測ASODN對細(xì)胞的抑制率為59.5l%,與對照組

7、相比差別有顯著性(P<0.05),且6.25pg/mI的DDP或5-FU與200nmol/L的ASODN聯(lián)合應(yīng)用,具有協(xié)同效應(yīng)(P<0.05),另外,200nmoI/L的ASODN與小劑量化療藥仍有協(xié)同作用。免疫組化檢測結(jié)果,ASODN轉(zhuǎn)染后survivin蛋白表達(dá)下降。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),survivinASODN轉(zhuǎn)染HT.29細(xì)胞后,其細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)增加,與對照組相比P<0.05。結(jié)論:結(jié)腸癌細(xì)胞系HT-29經(jīng)survivin反義寡聚核苷酸轉(zhuǎn)染后。survivin蛋白表達(dá)下降,細(xì)胞增殖被抑制,細(xì)胞凋亡增加,并且與化療藥具有

8、協(xié)同作用。【關(guān)鍵詞】survivin細(xì)胞凋亡結(jié)直腸癌反義寡核苷酸4天律醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Researchontheeffectsofsurvivinantisenseoligonucleotidei

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