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1、藏藥川西獐牙菜揮發(fā)性化學(xué)成分及抑菌活性研究論文張應(yīng)鵬楊云裳劉宇馬興銘【摘要】目的研究川西獐牙菜揮發(fā)油的化學(xué)組成及其抑菌活性。方法采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，用GC-MS進(jìn)行成分分析；選擇金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、傷寒沙門氏菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌為代表菌種，對(duì)揮發(fā)油的抗菌活性進(jìn)行了初步研究。結(jié)果分離出88種成分，鑒定出61種化合物，其峰面積相對(duì)含量約占揮發(fā)油總量的91.32%。川西獐牙菜揮發(fā)油的主要組分為二十六烷(12.88％)，二十八烷(17.83％)，1-碘-十六烷(7.27％)，11十烷基二十一烷(5.47％).freelussotiiFranc
2、h，龍膽科獐牙菜屬,一年生草本,高15～60cm，主根黃色，生于海拔3600～3800m的山坡、灌叢草地、林緣、河灘等［1］，在我國(guó)四川的西部,西藏及甘肅的海西、海北、黃南、玉樹、果洛等地區(qū)均有分布。川西獐芽菜也稱為藏茵陳,是特種藏藥,用于治療消化不良、膽囊炎、各型肝炎、急性骨髓炎、急性結(jié)膜炎、急性咽喉炎及燙傷,也用于風(fēng)火牙痛、熱淋等癥［2，3］。目前對(duì)獐牙菜屬的藥理和化學(xué)性質(zhì)的研究已有諸多報(bào)道［4］。但是，川西獐牙菜揮發(fā)性化學(xué)成分尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，筆者在研究印度獐牙菜揮發(fā)性化學(xué)成分的基礎(chǔ)上［5］，繼續(xù)對(duì)川西獐牙菜的揮發(fā)性化學(xué)成分和抑菌活性加以研究。1器材1.1
3、藥材川西獐芽菜，200311購(gòu)買自青海湟中藏醫(yī)院，植物標(biāo)本由蘭州大學(xué)生命科學(xué)院張國(guó)梁教授鑒定，植物標(biāo)本現(xiàn)存放于蘭州理工大學(xué)石油化工學(xué)院有機(jī)與藥物化學(xué)研究室。1.2試劑與菌株MH瓊脂、MH肉湯、平板菌落計(jì)數(shù)瓊脂:杭州微生物試劑廠；細(xì)菌菌株：金黃色葡萄球菌CMCC(B)ATCC25923，大腸埃希菌CMCC(B)ATCC25922：枯草芽孢桿菌O901，銅綠假單胞菌ATCC27853，傷寒沙門氏菌ATCC6539，蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室提供。所用試劑均為分析純。1.3儀器HP6890-5973GC/MS聯(lián)用儀(美國(guó)惠普公司);氣相色譜條件：色譜柱為SE-5
4、4（30m×0.25mm,33.0μm）；柱溫為40℃，以5℃·min-1的速率升至260℃，保持40min;進(jìn)樣口溫度為260℃；載氣為He氣，流速為0.3ml·min-1；進(jìn)樣量為0.2μl，分流比為50∶1。質(zhì)譜條件：離子源為EI，電子能量為70eV,接口溫度為280℃，質(zhì)量范圍為1～550amu，溶劑延遲0min。2方法與結(jié)果2.1揮發(fā)油的提取取川西獐牙菜干燥全草50g粉碎，加入200ml蒸餾水進(jìn)行水蒸氣蒸餾8h，收集餾出液700ml。萃取時(shí)，加入50g氯化鈉，以減少揮發(fā)性成分在水中的溶解度，用乙醚萃取餾出液6次，合并乙醚萃取液，用無(wú)水硫酸鈉干燥萃取液
5、1h，在30℃條件下回收乙醚，得到淺黃色油狀物,提取液具有特殊芳香氣味，密封保存，供分析用。2.2成分鑒定在上述色譜條件下進(jìn)樣，得到黃花補(bǔ)血草揮發(fā)油的總離子流圖(見圖1)。啟動(dòng)HP689OMS化學(xué)工作站，檢索NIST98譜圖庫(kù)，結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)人工檢索確定其化學(xué)組成［6］（見表1）。另外，通過(guò)與正烷烴化合物的保留時(shí)間比較，采用線性插入的方法計(jì)算各化合物在揮發(fā)油中的百分含量。各成分的保留指數(shù)，與文獻(xiàn)［7，8］化合物的保留指數(shù)進(jìn)行比較，進(jìn)一步確證各化合物。按峰面積歸一化法計(jì)算各化合物在揮發(fā)油中的百分含量，具體分析結(jié)果見表1。2.3抗菌活性分析［9］2.3.1菌液制備取
6、實(shí)驗(yàn)菌株接種于MH瓊脂平板培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)14h，用MH液體培養(yǎng)基制備菌懸液，菌液濃度1.5×108CFU·ml-1備用。2.3.2含藥物紙片制備將藥物溶解后，滅菌備用。每張紙片（直徑6mm）加藥物樣品10μl，陰性對(duì)照是助溶劑，空白對(duì)照生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照是慶大霉素溶液。2.3.3K－B法取菌液濃度為1.5×108CFU·ml-1的菌株0.2ml，均勻涂布整塊MH瓊脂培養(yǎng)基表面，室溫2～5min后，貼加含藥紙片，置入35℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16～18h，精確測(cè)定其紙片周圍抑菌環(huán)直徑的大小，結(jié)果以毫米（mm）表示。見表2。2.3.4揮發(fā)油濃度助溶劑為DMSO，濃
7、度Ⅰ：10mg/ml；濃度Ⅱ：22mg/ml；濃度Ⅲ：46mg/ml。3討論通過(guò)GC/MS分析,從川西獐牙菜揮發(fā)油中共分離出88個(gè)化合物,鑒定了其中61個(gè)，占化合物總數(shù)的51.1%，所鑒定的化合物含量占全揮發(fā)油的82.12%。分析鑒定結(jié)果表明，川西獐牙菜揮發(fā)油的主要組分為烷烴，分別為二十六烷(12.88％)，二十八烷(17.83％)，1-碘-十六烷(7.27％)，11-十烷基-二十一烷(5.47％)，2-十二烷氧基-乙醇(3.04％)，2-環(huán)己基-十一烷(2.19％)，1-碘-十八烷(3.21％)，四十四烷(5.47％)，二十九烷(4.29％)，11-十烷基-
8、二十一烷(5.47％)，三十烷(3.1
