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《自身免疫性感音神經(jīng)性聾豚鼠子代的內(nèi)耳功能與形態(tài)學(xué)研究 》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、自身免疫性感音神經(jīng)性聾豚鼠子代的內(nèi)耳功能與形態(tài)學(xué)研究〔摘要〕目的:觀察自身免疫性感音神經(jīng)性聾（ASNHL）雌性豚鼠子代內(nèi)耳聽覺生理功能及組織結(jié)構(gòu)病理變化，探討內(nèi)耳自身免疫因素與子代內(nèi)耳聽覺損傷的相關(guān)性。方法:采用同種粗制內(nèi)耳抗原（CIEAgs）免疫，造成雌性豚鼠ASNHL，妊娠后持續(xù)抗原強(qiáng)化免疫，對其所產(chǎn)子鼠進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測試和觀察，包括聽神經(jīng)復(fù)合動作電位閾值、幅值和耳蝸微音器電位偽閾，血清抗CIEAgs抗體水平以及內(nèi)耳病理形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果:ASNHL雌鼠的子代36只中有18只（22耳）出現(xiàn)聽力損傷，血清抗CIEAgs抗體增高，螺旋神經(jīng)
2、節(jié)細(xì)胞變性，數(shù)目減少，蝸螺旋管內(nèi)炎性細(xì)胞浸潤。結(jié)論:ASNHL所產(chǎn)子鼠可出現(xiàn)先天性感音神經(jīng)性聾和內(nèi)耳病理損傷，其發(fā)生可能與特異性體液免疫有關(guān)?！ 碴P(guān)鍵詞〕先天性感音神經(jīng)性聾;自身免疫;內(nèi)耳功能;豚鼠 我國新生兒的先天性聾發(fā)生率為1.1000～6.1000，其中以先天性感音神經(jīng)性聾（congenitalsensori-neuralhearingloss，CSNHL）居多。非遺傳性CSNHL的病因主要有妊娠期病原微生物感染、使用耳毒性藥物、高危妊娠等〔1〕，但仍有許多CSNHL原因不明。本項目組前期實驗研究發(fā)現(xiàn)，實驗性自身免疫性感音神
3、經(jīng)性聾（autoimmunesensorineuralhearingloss，ASNHL）豚鼠的子代中部分出現(xiàn)先天性聾〔2〕。本研究旨在通過觀察自身免疫性感音神經(jīng)性聾雌性豚鼠所產(chǎn)子代內(nèi)耳聽覺功能及組織結(jié)構(gòu)病理變化，進(jìn)一步探討自身免疫因素導(dǎo)致先天性聾的作用及其機(jī)制?！ ?對象和方法 1.1動物健康白化豚鼠70只，由南京醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，雌性50只，雄性20只，體重400～450g，耳郭反射陽性，耳鏡檢查排除中耳疾患。 1.2實驗方法 1.2.1實驗設(shè)計將雌鼠隨機(jī)分為兩組，第1組40只，首次免疫每只按0.4mg?（0.4
4、ml）-1粗制內(nèi)耳抗原（crudeinnerearantigens，CIEAgs）與等量完全弗氏佐劑乳化后于豚鼠右后足墊和背部多點皮下注射，以后每隔2周，采用CIEAgs0.4mg?（0.4ml）-1與等量不完全弗氏佐劑乳化后按上述方法強(qiáng)化免疫;第2組10只，用0.1mol?L-1pH7.4的PBS代替CIEAgs，免疫方法同第1組。免疫3次后進(jìn)行聽力測試，并以第2組聽神經(jīng)復(fù)合動作電位（cAP）N1波閾值、幅值和各頻率耳蝸微音器電位（CM）偽閾的均數(shù)加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差作為聽力損傷的標(biāo)準(zhǔn)，任一指標(biāo)異常判定為聽力損傷，從而確定第1組中產(chǎn)生的AS
5、NHL模型動物共14只，交配妊娠后持續(xù)強(qiáng)化免疫，其子代36只作為實驗組，第2組雌鼠的子代18只作為對照組。 1.2.2CIEAgs制備活體斷頭，顯微分離并取出豚鼠膜迷路（包括基底膜、螺旋韌帶、半規(guī)管、橢圓囊和球囊），經(jīng)超聲粉碎、勻漿、離心（1500r?min-1，5min），取上清液，在紫外分光光度計下分別測280、260nm的吸光度（A值），計算其蛋白含量，分裝后低溫干燥，制成干粉備用?！ ?.2.3耳蝸電圖檢測母鼠第3次免疫后2周、子鼠出生后2～3周進(jìn)行。采用面神經(jīng)管電極和Amplaidk12聽覺誘發(fā)電位測試系統(tǒng)，刺激聲信號為C
6、lick，重復(fù)頻率為11次?s-1，記錄cAPN1波閾值、幅值;采用0.5、2、8kHz短純音作為刺激聲信號，記錄CM偽閾?！ ?.2.4血清抗CIEAgs抗體檢測子鼠聽覺電生理檢測后取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗間接法進(jìn)行檢測。包被抗原為CIEAgs，一抗為1∶10稀釋的豚鼠血清，二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的葡萄球菌A蛋白，顯色底物為鄰苯二胺.過氧化氫溶液，檢測波長為490nm的吸光度A值?！ ?.2.5顳骨火棉膠切片觀察子鼠取血清后斷頭，取出聽泡，經(jīng)固定、脫鈣、脫水、浸膠、包埋等制成火棉膠塊，水平切片厚度為15μm。每一耳蝸取靠近蝸軸
7、的3張切片，HE染色后光鏡觀察。螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞計數(shù)按文獻(xiàn)〔3〕方法，目鏡加網(wǎng)格片，每小格在10×40放大倍數(shù)下覆蓋10μm×10μm面積，只計算底回數(shù)目?！ ?.3統(tǒng)計學(xué)方法計量資料以ˉx±s表示，統(tǒng)計學(xué)處理均采用t檢驗，以P0.05判斷為差異有顯著性意義。 2結(jié)果 2.1內(nèi)耳聽覺功能實驗組與對照組相比，cAPN1波閾值提高，幅值減小，各頻率CM偽閾提高，差異均有顯著性（P0.01）。見表1、2。表1子代豚鼠cAPN（略）表2子代豚鼠各頻率CM（略） 2.2血清抗CIEAgs抗體水平對照組血清抗體A值為0.1628±0.0357
8、，實驗組為0.5150±0.2444，兩組對比，差異有顯著性（P0.01）?！ ?.3火棉膠切片光鏡觀察實驗組鏡下見螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變性，分布稀疏，胞核濃縮，蝸螺旋管內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤（圖2），毛細(xì)胞形態(tài)正常，未見明顯膜迷路
