尿中ala測定實(shí)驗(yàn)報(bào)告

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1、308檢疫HapyWu尿中δ—氨基—γ—酮戊酸(δ—ALA)的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)會用乙酸乙酯萃取—對二氨基苯甲醛比色法測定尿中δ—氨基—γ—酮戊酸(δ—ALA)的含量，從而了解鉛吸收和鉛中毒的診斷。二、實(shí)驗(yàn)原理在PH為4.6及溫度為100℃的條件下，δ—ALA與乙酰乙酸乙酶縮合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，并與顯示劑（對二甲氨基苯甲醛）作用生成紅色化合物，根據(jù)顏色深淺進(jìn)行比色定量。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取具賽比色管10ml6支，按下表配置標(biāo)準(zhǔn)色列：試劑012345ALA標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）0.00.10.30.50.71.0水（ml）2.01.91.71.51.31.0A

2、LA含量（ug)0135710A.各管中加入2ml乙酸緩沖液，0.4ml乙酰乙酸乙酯，混勻，于沸水中加熱10分鐘，取出冷至室溫。B.各管加入4ml乙酸乙酯，加塞振搖1分鐘，離心5分鐘、取出靜置分層。C.各取乙酸乙酯提取液2ml于另外6支管中，各管加入2ml顯色劑，加塞振搖，靜置10分鐘。3A.用分光光度計(jì)（波長554），以零管作參比，測其吸光度。根據(jù)ALA濃度與吸光度的關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.尿樣測定A.預(yù)先測定尿液比重，測得尿樣比重為1.010。B.分別取1ml尿樣于兩支上述一樣的管內(nèi)，各加入水1ml，乙酸緩沖液2ml,混勻。其一為樣品管，另一為空白管。向樣品管中家兔0.4ml乙酰乙酸乙

3、酯，空白管中加入0.4乙酸緩沖液，充分混勻，同時置沸水浴中加熱10分鐘，取出冷至室溫。C.按標(biāo)曲繪制的B~D進(jìn)行，以乙酸乙酯作參比，進(jìn)行比色定量。四．實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算1.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制管號012345ALA含量（ug)0135710吸光度A00.0540.1520.2420.2880.4792.尿樣結(jié)果空白管為0.022，樣品管為0.110。帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品管中ALA含量為1.83ug。根據(jù)尿樣比重為1.010，在正常范圍內(nèi)，故3尿中ALA（mg/L)=樣品管中ALA含量（ug)=1.83mg/L五．實(shí)驗(yàn)結(jié)論根據(jù)鉛實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)值，尿中δ—氨基—γ—酮戊酸(δ—ALA)的診斷值為8mg/

4、L，因此本實(shí)驗(yàn)所用的尿樣樣品未超標(biāo)。六．實(shí)驗(yàn)討論1.進(jìn)行比色定量時，為什么樣品測定時用乙酸乙酯作參比？原因是標(biāo)準(zhǔn)曲線用的是應(yīng)用液，可以用零管參比，而測定管中的最大容積為乙酸乙酯，為了最大限度的消除背景吸收等帶來的誤差，因此選擇乙酸乙酯作為參比。2.若鳥樣比重不在正常的范圍內(nèi)，測的結(jié)果應(yīng)如何計(jì)算此時應(yīng)先進(jìn)行校正，采用公式：尿中ALA（mmol/L）=樣品管含量（ug）*1.030-1.000*0.00761（尿樣）尿比重-1.0003.實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意哪些在處理數(shù)據(jù)時，應(yīng)返回檢測一下數(shù)據(jù)結(jié)果是否在此方法的線性范圍內(nèi)，否則會影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度；同時因?yàn)樗玫脑噭橛袡C(jī)溶劑，易分解，最好采用近期

5、產(chǎn)品，顯色劑宜新鮮配制；取樣時應(yīng)準(zhǔn)確量取；離心過程中應(yīng)注意配平；加入顯色劑后應(yīng)在半個小時內(nèi)完成比色。