雞血藤提取物抗柯薩奇b3病毒活性組分研究

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1、雞血藤提取物抗柯薩奇B3病毒活性組分研究作者：郭金鵬，龐佶，王新為，諶志強，金敏，李君文【摘要】目的研究雞血藤提取物不同組分的抗柯薩奇B3病毒活性和性質。方法通過不同溶劑提取雞血藤活性成分，細胞病變效應法和四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)測定不同提取組分的體外抗柯薩奇B3病毒活性。結果通過初步分離純化得到有效成分具有抗柯薩奇B3病毒活性。用MTT法研究了雞血藤水提物和有效成分的細胞毒性和抗柯薩奇B3病毒活性，CC50分別為725.88，179.17μg/ml，IC50分別為87.17，9.14μg/ml，TI分別為8.32，19.60。陽性對照為利巴韋林(Riba

2、virin)的CC50為4900μg/ml，IC50為156.2μg/ml，其TI為31.4。結論雞血藤有效成分在體外能明顯抑制柯薩奇B3病毒的致細胞病變作用。【關鍵詞】雞血藤;柯薩奇B3病毒;四甲基偶氮唑鹽比色法;細胞病變效應法　　Abstract：ObjectiveToassaytheanti-coxsackievirusB3effectsofthedifferentextractsfromSpatholobussuberectusDunn.MethodsTheanti-coxsackievirusB3activityoftheextractsofSpath

3、olobussuberectusDunn.ethodandMTTmethod.ResultsByre-extractingSpatholobussuberectusDunn.maintainingantiviralactivityl,87.17μg/ml,8.32and179.17μg/ml,9.14μg/ml,19.60,respectively,measuredbyMTTmethodarkableanti-CoxsackievirusB3activityinvitro.　　Keyethod;CPEmethod　　柯薩奇病毒B3(Coxsackievirusg

4、roupBtype3，CVB3)是病毒性心肌炎的主要病原[1,2]，病毒持續(xù)感染可導致擴張型心肌病[3,4]。目前，臨床缺乏有效的抗病毒治療藥物。雞血藤是一味沿用千年的活血化淤中藥,古代多篇本草論著中都記載了其“去淤血，生新血”的功效，并稱之為“血分之圣藥”[5]。中醫(yī)認為其有補血活血、舒筋活絡的功能，用于治療月經不調、血虛萎黃、麻木癱瘓、風濕痹痛等癥[6]。現(xiàn)代臨床常用雞血藤(單用或以雞血藤為主組方)治療各種原因(如放化療、血液系統(tǒng)疾病)引起的白細胞、血小板、紅細胞等全血象減少疾病[7]。近年來對雞血藤化學成分和藥理學研究證明，在抗腫瘤、抗氧化、抗病毒等方面具

5、有較好的作用。實驗證明，密花豆(雞血藤原材的一種)提取物對單純皰疹病毒Ⅰ型有較強的作用，且細胞毒性低，其50%細胞致死濃度(CC50)為阿糖胞苷的3倍，選擇毒性指數(shù)(ST)與阿糖胞苷相同。密花豆總提取物和其聚酰胺柱層析成分在抗HIV逆轉錄酶(HIV-RT)活性抑制實驗中顯示出較強的作用，當濃度為0.4μg/ml其抑制率為83.12%～94.01%，當濃度為1μg/ml其抑制率為97.5%～99.86%，當濃度為2μg/ml可完全抑制HIV-RT的活性[8]。厚果雞血藤水提物和乙醇提取物除具有抑制HIV-RT的活性外，并且可抑制DNA多聚酶和RNA多聚酶[9]。雞

6、血藤抗病毒作用的研究目前僅局限于皰疹病毒和艾滋病毒等。本研究將雞血藤水提液針對腸道病毒屬柯薩奇B3病毒進行了體外抗病毒實驗，并對有效成分進行了初步提取和分離，以期為在抗病毒方面的廣泛應用提供數(shù)據(jù)。　　1材料與儀器　　1.1材料雞血藤SpatholobussuberectusDunn.購自天津達仁堂藥店。細胞，非洲綠猴腎細胞(VeroE6cellline)，本室保存。病毒，CoxsackievirusB3(CVB3)，柯薩奇病毒B3，本室保存。　　1.2試劑培養(yǎng)基，RPMI-1640(GIBCO產品)按照說明溶解，調節(jié)至pH7.2，G5砂芯漏斗過濾除菌，加入胎牛血

7、清(天津川頁有限公司)至濃度為10%，100U/ml青霉素(重慶藥友制藥有限責任公司)和100μg/ml硫酸鏈霉素(上海四藥股份有限公司)，胰蛋白酶(GIBCO產品)，噻唑藍(MTT，Sigma產品)，50ml培養(yǎng)瓶、96孔培養(yǎng)板(Costar產品)，利巴韋林注射液(Ribavirininjection，上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號040661);磷酸緩沖液PBS(不含Ca2+，Mg2+)：自配，所用化學試劑為國產分析純，D-101大孔樹脂為天津海光化工廠產品?！　?.3儀器砂芯漏斗，G5吉林省長春市玻璃制品廠。酶標儀，芬蘭Labsystem公司。真空冷凍干燥

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