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《柯薩奇病毒B3的多克隆抗體制備.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第45卷第5期哈爾濱醫(yī)科大學學報Vo1．45．No．52011年10月JOURNALOFHARBINMEDICALUNIVERSITYOct．．2011397基礎研究柯薩奇病毒B3的多克隆抗體制備代海麗，欒穎。，高鐵磊，朱琳，靳占峰h(1．哈爾濱醫(yī)科大學病理教研室和法醫(yī)教研室；2．哈爾濱醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院心內科，黑龍江哈爾濱150081)[摘要]目的制備柯薩奇病毒B3(coxsackievirusB3，CVB3)的多克隆抗體。方法針對CVB3基因的VP1區(qū)設計特異性引物，RT—PCR擴增VP1基因并將其
2、克隆到pGEX一6p一1中，經IPTG誘導表達后，以GST—VP1融合蛋白作為抗原免疫新西蘭大白兔，制備多克隆抗體j采用ELlSA、Westernblot以及間接免疫熒光檢測多克隆抗體的效價和特異性。結果ELISA檢測血清的效價不低于1：64000，Westernblot和間接免疫熒光顯示該抗體具有良好的特異性。結論成功制備了效價較高的CVB3多克隆抗體，可應用于CVB3蛋白的檢測。[關鍵詞]柯薩奇病毒B3；多克隆抗體；原核表達；融合蛋白[中圖分類號]R373．23[文獻標識碼]A[文章編號]1000—1
3、905(2011)05—0397—04PreparationofpolyclonalantibodyofeoxsackievirusB3DAIHai．1．i．，LUANYing，GAOTie．1ei，ZHULin，JINZhan．feng(1．DepartmentofPathologyandForensicMedicine；2．DepartmentofCardiology，TheSecondAfiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity，Harbin150081，Ch
4、ina)Abstract：ObjectiveTopreparepolyclonalantibodyagainstcoxsackievirusB3(CVB3)．MethodsSpecificprimerswhichbasedonVP1geneofCVB3weredesigned，VP1geneam—plifiedbyRT—PCRwasclonedintopGEX一6p一1．HightiterpolyclonalantiserumwasobtainedbyimmunizingNewZealandrabbits
5、withGST．VP1fusionproteinwhichwasinducedbyIfyrG．ThentiterofthepolyclonalantibodywasdeterminedbyELISAandspecificityofitwastestedbyWesternblotandiridirectimmunofluorescenceassay．ResultsThetiterofantiserumagainstCVB3wasabove】：64000．Westernblotandindirectimmun
6、ofluofescenceanalysisshowedthatthepolyclonalantibodycouldbindtotheCVB3proteinspecifically．Conclusion．HighspecificpolyclonalantibodyagainstCVB3wasprepared．whichmightbeusedfordetec—tionofCVB3proteinincommercialproducts．Keywords：coxsackievirusB3；polyclonalan
7、tibody；prokaryoticexpression；fusionprotein柯薩奇病毒B3(coxsackievirnsB3，CVB3)屬小肝炎j、胰腺炎和無菌性腦膜炎J。近年來其發(fā)RNA病毒科，腸道病毒屬。流行病學調查顯示，約病呈上升趨勢，但目前尚缺乏有效的防治措施。50％的病毒性心肌炎與腸道病毒感染有關，特別是CVB3呈球形，直徑約22～30nm，為單股正鏈RNA，與CVB3的關系最為密切㈩。同時，CVB3還會引起全長由7396個堿基組成，具有mRNA活性和感染性J。依據(jù)其功能分，可分為5端非
8、編碼區(qū)[收稿日期]2011—03—31(5untranslatedregion，5．UTR)、P1區(qū)、P2區(qū)、P3[基金項目]黑龍江省自然科學基金項目(D2007—54)；黑龍江省教育廳科學技術研究項目(11531079)區(qū)、3端非編碼區(qū)(3-UTR)和一個Poly(A)尾。Pl[作者簡介]代海麗(198'6一)，女，山東巨野人，碩l卜研究生。通區(qū)編碼病毒的主要結構蛋白即衣殼蛋白，該區(qū)由訊作者VP1、VP2、VP3和VP4組成
