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《水稻轉(zhuǎn)gafp基因?qū)y枯病抗性的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、StudyonResistancetoSheathBlightforTransgenicGAFPRiceLinesByXueXiangADissertationSubmittedtoYangzhouUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementfortheMasterDegreeofAgriculturalScienceSupervisorByProf．PanXuebiaoYangzhouUniversityYangzhou，225009，P．R．ChinaMay2012水稻轉(zhuǎn)GAFP基因?qū)y枯病抗性的研究摘要立枯絲核菌(Rh
2、izoctoniasolaniKiihn)手}起的水稻紋枯病是水稻生產(chǎn)中重要的真菌病害，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致巨大的產(chǎn)量損失和嚴(yán)重的品質(zhì)降低。天麻抗真菌蛋白(Gastrodiaantifungalprotein，簡(jiǎn)稱GAFP)是從我國(guó)傳統(tǒng)中藥天麻(GastrodiaealatBl．)中分離得到的一種具有廣譜抗真菌活性的蛋白質(zhì)，它對(duì)許多植物的致病真菌有很強(qiáng)的抑制活性，因此在植物抗真菌病基因工程上有很重要的應(yīng)用價(jià)值。通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以打破物種間的生殖隔離而充分利用自然界中的基因，為選育新品種提供了全新、有效的輔助途徑。本研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將天麻抗真菌蛋白(OAFP)的基因GAFP
3、分別轉(zhuǎn)入粳稻徐稻3號(hào)和秈稻R6547中，并檢測(cè)這些基因在受體植物內(nèi)的整合、轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，然后將所獲得的轉(zhuǎn)化植株后代在大田中進(jìn)行抗病性鑒定，通過篩選試圖獲得對(duì)紋枯病有顯著抵抗能力的水稻新品系。主要研究結(jié)果如下：1．組織培養(yǎng)體系的優(yōu)化(1)NaCIO濃度及消毒時(shí)間的確定通過研究發(fā)現(xiàn)將去殼水稻種子經(jīng)70％酒精浸泡1．2min后用25％NaCl0消毒30min是水稻成熟胚種子適宜的滅菌方法。(2)添加ABA對(duì)水稻愈傷的影響在水稻品種R6547組織培養(yǎng)過程中，添加一定濃度的ABA有利于抑制胚芽的過度生長(zhǎng)，使愈傷組織結(jié)構(gòu)致密，提高誘導(dǎo)率。2、轉(zhuǎn)基因水稻植株后代的分子檢測(cè)通過PCR檢測(cè)確
4、認(rèn)了陽性轉(zhuǎn)化株，用Southern雜交進(jìn)一步證實(shí)了GAFP基因已整合到受體植物基因組，用RT-PCR驗(yàn)證了SG2基因在植物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄，熒光定量PCR檢測(cè)了SG2基因在植物細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量。遺傳分析表明，GAFP基因在轉(zhuǎn)基因后代中的分離符合3：l的理論比例。3、T2代轉(zhuǎn)基因水稻植株的田間抗性鑒定(1)徐稻3號(hào)(粳稻)背景的紋枯病抗性鑒定徐稻3號(hào)有5個(gè)載體的轉(zhuǎn)化后代進(jìn)入抗性鑒定試驗(yàn)，5個(gè)載體分別為G3、SG3、G4、SG4、SG2。研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，天麻抗真菌蛋白基因的轉(zhuǎn)化后代，病情極顯著地被減輕了。其中載體SG2的抗性效果最佳，表現(xiàn)出在輕病年病級(jí)減輕2．03級(jí)。(2
5、)R6547(秈稻)背景的紋枯病抗性鑒定R6547有5個(gè)載體的轉(zhuǎn)化后代進(jìn)入抗性鑒定試驗(yàn)，5個(gè)載體分別為G1、G2、G4、SG3、SG4。研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照相比，天麻抗真菌蛋白基因的轉(zhuǎn)化后代，病情極顯著地被減輕了。其中載體SG3的抗性效果最佳，表現(xiàn)出在輕病年病級(jí)減輕2。21級(jí)。(3)外源基因表達(dá)水平與抗性之間的關(guān)系熒光定量PCR結(jié)果表明，SG2基因的轉(zhuǎn)錄水平與紋枯病抗性之間存在相關(guān)性．關(guān)鍵詞：水稻，紋枯病，GAFP，組織培養(yǎng)，分子檢測(cè)，抗性鑒定StudyonResistancetoSheathBlightforTransgenicGAFPRiceLinesAbstractSh
6、eathblight，whichcausedbyRhizocton&solaniKiahn，isanimportantfungaldiseaseinrice．Itleadstohugeyieldlossandaffectsricequalityseverely．Gastrodiaantifungalprotein(GAFP)isolatedfromtraditionalChinesemedicinalherbGastrodiaelataB1．isasmallproteinwithabroadspectrumofantifungalactivityanditshowsthe
7、strongresistancetoricediseasesbymanypathogenicfungi．Itmaybeappliedinplantantifungalgeneticengineering．Inthisstudy,thegeneencodingGastrodiaantifungalproteinWasintroducedintotworicecultivarsXuda03(Japonica)andR6547(Indica)byAgrobacteriummediatedtransformation．Theinteg
