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《外源基因GAFP提高水稻紋枯病抗性的效應(yīng)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、StudyonResistancetoSheathBlightforTransgenicGAFPRiceLinesByPengL正iADissertationSubmittedtoYangzhouUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementfortheMasterDegreeofAgriculturalScienceSupervisorByProf．PanXuebiaoYangzhouUniversityYangzhou，225009，P．R．ChinaMay2013
2、摘要水稻原產(chǎn)亞熱帶，是中國乃至世界的重要糧食作物之一，也是我國一半以上人口的主糧。而紋枯病是水稻的三大病害之一，俗稱爛腳病，花腳桿。隨著植株矮化，栽培密度和施肥水平的提高，紋枯病的危害日益加重。根據(jù)調(diào)查顯示，紋枯病已經(jīng)成為了中國南方部分水稻種植區(qū)的第一大病害，嚴(yán)重威脅著水稻的產(chǎn)量。本研究從天麻中分離得到天麻抗真菌蛋白(簡稱GAFP)及其3個(gè)同源序列，并通過添加信號(hào)肽進(jìn)行載體優(yōu)化，共構(gòu)建了8個(gè)植物轉(zhuǎn)化載體。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入到徐稻3號(hào)和R6547中，并通過組培手段得到轉(zhuǎn)化苗，然后進(jìn)行分子檢測和田間鑒定，確定其是否能
3、提高水稻對紋枯病的抗性。主要的研究結(jié)果有：1．組織培養(yǎng)體系的優(yōu)化(1)徐稻3號(hào)的培養(yǎng)基的選擇：徐稻3號(hào)在N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的愈傷組織結(jié)構(gòu)致密、顏色為嫩黃色、呈顆粒狀、表面光滑、生長旺盛。而在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的愈傷組織顏色為暗黃色、呈不分散的表面水漬狀，不利于繼代培養(yǎng)。所以選擇N6培養(yǎng)基。(2)添力NABA對水稻成熟胚愈傷組織的影響：與不添jJHABA相比，添=cIHABA可有效的抑制胚芽生長，并有利于胚性愈傷的形成，獲得的愈傷組織結(jié)構(gòu)致密，質(zhì)地堅(jiān)硬，表面有突起，呈乳白色，并稍提高其成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)率。(3)水稻愈
4、傷組織對篩選劑G418的敏感測驗(yàn)：，R6547的愈傷組織比徐稻3號(hào)的愈傷組織對G418更敏感。徐稻3號(hào)的愈傷組織在添加350mg／L的G418時(shí)對本身產(chǎn)生傷害，但是添加50—150mg／L時(shí)，對愈傷組織沒有選擇的作用，所以在250mg／L的G418時(shí)，是選擇抗性愈傷組織的最適濃度，所以本試驗(yàn)徐稻3號(hào)的G418一篩濃度為150mg／L，二篩濃度為250mg／L；同理R6547的G418一篩濃度為100mg／L，二篩濃度為150mg／L。2．轉(zhuǎn)基因水稻植株的分子檢測通過PCR檢測陽性轉(zhuǎn)化子和陽性純系；然后進(jìn)行South
5、ern雜交證實(shí)基因已經(jīng)整合到受體基因組中及其拷貝數(shù)；實(shí)時(shí)定量PCR檢測其相對表達(dá)量。3．轉(zhuǎn)基因后代對紋枯病的抗性表現(xiàn)徐稻3號(hào)和R6547有7個(gè)載體的轉(zhuǎn)化后代進(jìn)入T2代抗性鑒定試驗(yàn)，這7個(gè)載體分別為G1、G2、SG2、G3、SG3、G4、SG4，共計(jì)116個(gè)純合轉(zhuǎn)化株系參試。研究發(fā)現(xiàn)，與對照相比，GAFP的轉(zhuǎn)化后代病級(jí)極顯著地減輕，其中SG2的抗性效果做好，病級(jí)減輕了1．16。徐稻3號(hào)2個(gè)載體SGl、G2和R65471個(gè)載體SGl，由于得苗較遲，采用Tl代植株進(jìn)行抗性接種鑒定。每個(gè)載體有3個(gè)轉(zhuǎn)化子。每個(gè)載體的轉(zhuǎn)化子檢
6、測陽性株和陰性株，并與各植株的病級(jí)相對應(yīng)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明，各載體下陽性株和陰性株的平均病級(jí)之間存在極顯著差異，說明這些載體的轉(zhuǎn)化后代(陽性株)比陰性株的病級(jí)極顯著地減輕。關(guān)鍵詞：水稻，紋枯病，GAFP，組織培養(yǎng)，抗性鑒定AbstractRiceisnativetosubtropicalzone，whichisoneofthemostimportantfoodcropsintheworld．ItaccountsforabouthalfpercentofcerealconsumptioninChina．Shea
7、thblightisoneofthethreemostseriousricediseasesworldwide．Astheplantdwarfing，increasingplantdensityandfertilizerlevel，thediseaseaggravatedprogressively．Theresearchonresistancetosheathblightdiseasedevelopsrapidlyandhasbecomethemostseverediseaseinpartofsouthernric
8、e-growingregionofourCOuntry．Anantifungalproteinofgastrodiaclara(GAFP)geneandthe3homologoussequenceshavebeenclonedandaddedaguidepeptide，constructed8plantexpressionvectors．Theyweretr
