影響豬卵母細胞體外成熟的相關(guān)因素

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1、9期張莉等：影響豬卵母細胞體外成熟的相關(guān)因素1895影響豬卵母細胞體外成熟的相關(guān)因素張莉，馮書堂（中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所，基因與細胞工程研究室，北京100094）摘要：卵母細胞是胚胎工程和發(fā)育生物學的重要組成部分，它是體外受精、性別控制、克隆及轉(zhuǎn)基因等技術(shù)成功與否的前提和關(guān)鍵。影響豬卵母細胞體外成熟的因素很多，本文將從物理因素和化學因素兩方面作簡要綜述。關(guān)鍵詞：豬；卵母細胞；體外成熟；物理因素；化學因素FactorswithinvitroMaturationofPorcineOocyte

2、sZHANGLi，F(xiàn)ENGShu-tang（DepartmentofGeneandAnimalCellEngineering,InstituteofAnimalScience,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100094）Abstract:Oocyteinvitromaturationplaysanimportantroleinembryonicengineeringsuchasinvitrofertilization,nucleartran

3、sfer,sexcontrol,cloningandgenetransfer.Theinvitromaturationofporcineoocytesisthecrucialstepandpreconditioninembryoproduction.Itisaffectedbyvariousfactors.Inthisstudy,physicalandchemicalfactorsinvitromaturationofporcineoocytesarediscussed.Keywords:Porc

4、ine;Oocyte;invitromaturation;Physicalfactors;Chemicalfactors9期張莉等：影響豬卵母細胞體外成熟的相關(guān)因素1895豬胚胎工程已極大地推進了畜牧業(yè)和醫(yī)學的進程，通過它可以改良品種、培育抗病豬種、提高肉質(zhì)、生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因豬或基因組修飾豬、制備人類疾病模型、進行器官移植、生產(chǎn)藥物蛋白、研究發(fā)育機理等。卵母細胞體外成熟是胚胎工程和發(fā)育生物學的重要組成部分，是胚胎體外生產(chǎn)的上游環(huán)節(jié)，其質(zhì)量的優(yōu)劣和成熟率很大程度上決定了后期的結(jié)果。體外卵母細胞無論是成熟還

5、是受精后支持發(fā)育的能力都比體內(nèi)差，這說明體外成熟培養(yǎng)環(huán)境還遠未達到體內(nèi)的生理水平[1]。影響豬卵母細胞體外成熟的因素很多，本文擬通過綜述物理因素和化學因素，以期和同行們共同探討，摸索豬卵母細胞體外成熟的最佳培養(yǎng)體系和條件，為豬胚胎工程提供技術(shù)。1物理因素1.1卵巢來源豬的品種、年齡及健康狀況豬的品種、年齡及健康狀況不同，其卵母細胞的質(zhì)量和體外成熟培養(yǎng)的效果亦不同。一般來講，不同國家和地區(qū)，豬種之間都會存在因遺傳背景、特定的氣候條件、飼養(yǎng)環(huán)境及方式和營養(yǎng)水平的不同而造成品種品質(zhì)上的差異，從而導致卵母

6、細胞質(zhì)量的差異[2]。而從同一品種豬抽取不同豬的卵泡卵母細胞，其培養(yǎng)效果也會因為各個豬的年齡、健康狀況、卵巢形態(tài)的不同而不同。比如，處在育齡盛期的健康成年母豬，其卵巢體積大，有黃體，顏色也較深，卵巢表面卵泡多而且直徑在3～6mm的卵泡所占比例相對較高，抽得的卵母細胞形態(tài)完好，裸卵少，體外成熟培養(yǎng)效果也好。反之，取自仔豬、青年豬、老母豬及老弱病殘豬的卵母細胞體外成熟培養(yǎng)效果較差。1.2卵巢離體時間通常情況下，卵巢離體時間越短越好，也就是盡可能及早地將卵母細胞抽出進行培養(yǎng)，目前比較公認的卵巢離體時間應(yīng)

7、在3～4h之內(nèi)。但實際上，因為各種主觀和客觀因素的限制，卵巢離體時間往往超過3h9期張莉等：影響豬卵母細胞體外成熟的相關(guān)因素1895以上，這就使卵母細胞的生存環(huán)境受到一定的應(yīng)激，從而影響其進一步發(fā)育。文國藝等報道[3]，母豬卵巢離體時間的長短直接影響卵母細胞的體外成熟及卵裂率，卵裂率將隨著卵巢離體時間的增加呈降低的趨勢。1.3卵巢回收溫度不同于其它哺乳動物，豬卵子對溫度特別敏感，如果送回實驗室的卵巢溫度過高或過低，都會影響卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)效果，一般比較適宜的卵巢送達溫度范圍是32～35℃。夏

8、季室內(nèi)外溫度都較高，因此溫度相對容易控制；但冬季的晝夜溫差大，室內(nèi)外溫度也較低，因此，卵巢溫度的控制就顯得尤為重要。文國藝研究了卵巢保存溫度對豬體外受精的影響[3]，發(fā)現(xiàn)當卵巢回收溫度低于25℃，豬的卵母細胞將受到低溫應(yīng)激；溫度還將通過影響豬卵母細胞的體外成熟繼而影響到體外受精，當卵巢回收溫度為36～39℃、25～28℃、14～17℃時，豬體外受精的卵裂率分別為52.3%、49.8%、28.8%。1.4卵巢的質(zhì)量及卵泡的大小采自不同或相同卵巢上卵泡的大小都不一樣，目前將卵巢卵泡按直