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《褪黑素對熱應(yīng)激豬卵母細胞體外成熟的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI碩士學(xué)位（畢業(yè)）論文褪黑素對熱應(yīng)激豬卵母細胞體外成熟的影響學(xué)位申請人：張振南指導(dǎo)教師：李相運教授學(xué)科專業(yè)：動物遺傳肓種與繁殖學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二〇一五年五月三十日獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得河北農(nóng)iL大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)
2、位論文作者簽名：簽字日期年G月j日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解河北農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)河北農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：/^r-^%簽字日期：20&年^月1円簽字日期：似卑&月3日學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：電話:通訊地址：郵編:分類號：S814.6單位代碼：10086密級：公開學(xué)號：2012329褪
3、黑素對熱應(yīng)激豬卵母細胞體外成熟的影響Effectsofmelatoninonheatstressporcineoocytesinvitromaturation學(xué)位申請人：張振南指導(dǎo)教師：李相運教授學(xué)科專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二〇一五年五月三十日基金項目資助受“十二五”國家科技支撐計劃課題任務(wù)“家畜胚胎保存與性控雙犢誘導(dǎo)技術(shù)研究與示范”（2011BAD19B01）、“863計劃”國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃“家畜卵母細胞冷凍、胚胎表觀修飾和體細胞克隆技術(shù)研究（2011AA100303）”項目資助。摘要本試驗的目的是研究熱應(yīng)激對豬卵
4、母細胞體外成熟的影響，以及在成熟培養(yǎng)基中添加褪黑素對熱應(yīng)激豬卵母細胞體外成熟的作用。以豬卵巢中分離出的GV期COCs為研究對象，通過體外41℃生理熱應(yīng)激4h后成熟至MII期，對卵母細胞中線粒體DNA拷貝數(shù)、胞質(zhì)中線粒體分布情況、線粒體染色熒光強度、核編碼線粒體相關(guān)基因和線粒體編碼基因的表達進行檢測，以及觀察孤雌激活后胚胎的發(fā)育情況。-9將豬卵母細胞按對照組（C組）、正常培養(yǎng)加10M褪黑素組（C+M(-9)組）、-8-9正常培養(yǎng)加10M褪黑素組（C+M(-8)組）、熱應(yīng)激組（H組）、熱應(yīng)激加10M-8褪黑素組（H+M(-9)組）、熱應(yīng)激加10M褪黑素組（H+M(-8)組）隨
5、機分成6組，體外成熟培養(yǎng)至MII期，孤雌激活后觀察胚胎發(fā)育情況，試驗結(jié)果顯示：與C組相比，C+M(-8)組能夠顯著提高豬卵母細胞的囊胚發(fā)育率（P＜0.05）；在H組中，熱應(yīng)激顯著的降低了囊胚發(fā)育率（P＜0.05），熱應(yīng)激培養(yǎng)基中添加褪黑素能夠提高囊胚率（P＜0.05），但是H+M(-8)組能夠顯著的提高囊胚率（P＜0.05）而H+M(-9)組只有提高的趨勢但差異并不顯著（P＞0.05）。其中卵母細胞的卵裂率并不受不同處理的影響，各處理的卵裂率差異不顯著（P＞0.05）。線粒體拷貝數(shù)可作為衡量卵母細胞成熟的重要指標之一，本試驗進一步研究熱應(yīng)激對豬卵母細胞中mtDNA拷貝數(shù)的
6、影響。同樣卵母細胞隨機分成六組，成熟培養(yǎng)至MII期，利用RT-PCR方法對卵母細胞中mtDNA拷貝數(shù)進行量化，試驗結(jié)果表明：與C組相比，C+M(-8)組顯著的提高了卵母細胞中mtDNA拷貝數(shù)（P＜0.05）；在熱應(yīng)激的條件下，H組的mtDNA顯著降低（P＜0.05），而H+M(-9)組和H+M(-8)組都能夠顯著的提高mtDNA拷貝數(shù)（P＜0.05）。這與孤雌胚胎發(fā)育的數(shù)據(jù)吻合，說明熱應(yīng)激降低卵母細胞的發(fā)育潛能是通過減少胞質(zhì)中mtDNA拷貝數(shù)來影響卵母細胞胞質(zhì)的成熟。在卵母細胞成熟過程中，線粒體的分布也隨成熟的過程發(fā)生移位。利用Mito-Tracker染色觀察MII期豬卵
7、母細胞中線粒體的分布情況。與C組相比，H組中細胞胞質(zhì)中線粒體分布不均，出現(xiàn)空洞，而H+M(-8)組中，線粒體又恢復(fù)了正常的分布。這說明褪黑素也通過影響線粒體的分布來提高卵母細胞成熟的質(zhì)量。同時對Mito-Tracker染色熒光信號強度進行定量分析得出，與C組相比，褪黑素能夠顯著提高C+M(-8)組的熒光信號強度（P＜0.05）；而H組中，熱應(yīng)激使得線粒體染色強度明顯降低（P＜0.05），而H+M(-8)組又顯著提高了熒光信號強度（P＜0.05）。這說明褪黑素增加了卵母細胞中活性線粒體數(shù)量同時保持線粒體膜電位處于正常水平。在豬卵
