苯并[α]芘對(duì)櫛孔扇貝生殖毒性機(jī)制的研究

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)苯并【Q】芘對(duì)櫛孑L扇貝生殖毒性機(jī)制的研究萬(wàn)方數(shù)據(jù)謹(jǐn)以此論文獻(xiàn)給研究海洋軟體動(dòng)物生殖毒性的科研工作者!萬(wàn)方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：砷趟馳’簽字日期：如，f年j月)P日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允

2、許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)學(xué)?？梢詫W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽名：砷渺導(dǎo)師簽簽字日期：x侈年j月螬日簽字日期≯f湃廠月叼代萬(wàn)方數(shù)據(jù)苯并【a】芘對(duì)櫛孔扇貝生殖毒性機(jī)制的研究苯并[僅]芘對(duì)櫛孑L扇貝生殖毒性機(jī)制的研究摘要本文參照目前我國(guó)近海多環(huán)芳烴(PolycyclicAromaticHydrocarbons，PAHs)代表物質(zhì)之一苯并[Q]芘(benzo[a

3、]pyrene，BaP)的真實(shí)污染程度，以近海養(yǎng)殖重要經(jīng)濟(jì)貝類(lèi)櫛孔扇貝(Chlamysfarreri)為研究對(duì)象，篩選了BaP脅迫下性腺差異表達(dá)基因，測(cè)定了櫛孔扇貝性腺及血淋巴性激素含量，探究了多濃度多時(shí)間點(diǎn)BaP脅迫下生殖毒性響應(yīng)關(guān)鍵基因的表達(dá)模式，并研究了BaP脅迫對(duì)櫛孑L扇貝卵巢、精巢DNA單鏈斷裂、蛋白質(zhì)羰基含量、MDA含量影響，最后以組織顯微切片的方式驗(yàn)證BaP對(duì)櫛孔扇貝性腺造成的生殖毒性。得到的具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1．櫛孔扇貝在BaP脅迫下性腺差異表達(dá)基因的篩選與分析本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用數(shù)字基因表達(dá)譜技術(shù)(Digitalgeneexpression，DGE)根據(jù)櫛孔扇貝性腺組織對(duì)照組和O．5

4、“g／LBaP染毒組10d的DGE數(shù)據(jù)對(duì)比篩選差異表達(dá)基因。其中精巢組織對(duì)照組與染毒組分別獲取12485055和14454127條cleanreads，將cleanreads與本實(shí)驗(yàn)室己提交的櫛孔扇貝轉(zhuǎn)錄組(SRP018044)unigene進(jìn)行拼接比對(duì)，比對(duì)率分別為74．24％和77．27％；通過(guò)數(shù)據(jù)分析，共篩得差異表達(dá)基因1051條，其中上調(diào)基因223條，下調(diào)基因828條。經(jīng)GO功能聚類(lèi)分析顯示，差異基因主要涉及芳香族化合物代謝、ATP代謝、免疫防御、細(xì)胞凋亡和精子發(fā)育、精子分化等功能；KEGG通路分析表明富集顯著的代謝通路包括三羧酸循環(huán)通路、氧化磷酸化通路、NOD．1ike受體信號(hào)通路

5、、類(lèi)固醇合成通路等。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QRT-PCR)技術(shù)，選取9條差異表達(dá)關(guān)鍵基因(HSP90、CYP3A、HGD、CDK2、lAP、TSSK2、PDE5和17HSD、E2SUIJ)驗(yàn)證了DGE結(jié)果的可靠性。卵巢組織對(duì)照組和染毒組DGE分別獲取13，666，882和14，276，579條cleanreads，比對(duì)率分別為74．55％和78．46％，共篩得差異表達(dá)基因124條，其中上調(diào)基因42條，下調(diào)基因82條。與苯并芘生殖毒性相關(guān)的差異基因主要聚類(lèi)于解毒代謝、細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞間相互作用的損傷效應(yīng)、內(nèi)分泌干擾效應(yīng)和組織損傷等效應(yīng)。由以上看出，櫛孔扇貝在BaP脅迫下精巢的解毒代謝、能量代

6、謝和免疫防御等功能發(fā)生了變化，引起了細(xì)胞凋亡等損傷效應(yīng)，并干擾了類(lèi)固醇(性激素前體物質(zhì))的合成和精子的形成過(guò)程：卵巢的解毒代謝、細(xì)胞骨架及性I萬(wàn)方數(shù)據(jù)苯并【Q】芘對(duì)櫛孔扇貝生殖毒性機(jī)制的研究腺發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)水平發(fā)生了變化，引起了細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)疏松，造成了損傷效應(yīng)，并干擾卵巢發(fā)育等過(guò)程。2．櫛孔扇貝在BaP脅迫下生殖內(nèi)分泌干擾效應(yīng)的研究本實(shí)驗(yàn)將櫛孔扇貝暴露于染毒濃度為0、0．1、0．5、2。5rtgm的BaP中，分別于O、3d、10d、21d取樣，采用酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定櫛孔扇貝精巢卵巢及血淋巴中性激素的含量，采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)測(cè)定了DGE測(cè)序篩得的差異表達(dá)的細(xì)胞粘連、凋亡相關(guān)基因(早．IT

7、GA9、COL6A3，艿．5IAP、CDK2)，性激素合成和性腺發(fā)育相關(guān)基因(早．CYPl7、3p．HSD、17p．HSD、ER、VTG，8一CYPl7、3p—HSD、17B．HSD、TSSK2、PDE)，研究了BaP脅迫對(duì)櫛孔扇貝性激素含量的影響，探究了多濃度多時(shí)間點(diǎn)BaP脅迫下生殖毒性響應(yīng)關(guān)鍵基因的表達(dá)模式。本研究中BaP脅迫對(duì)櫛孔扇貝性腺組織和血淋巴三種激素含量均產(chǎn)生了顯著影響。在卵巢組織中，BaP顯著