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《基于丙谷二肽的酶促合成研究》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、天津大學(xué)碩士學(xué)位論文丙谷二肽的酶促合成研究姓名:于清新申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):化學(xué)工程指導(dǎo)教師:何志敏201006中文摘要本文以重要的腸外營(yíng)養(yǎng)用藥——丙谷二肽的酶法制備為核心內(nèi)容,設(shè)計(jì)完成了包括引入保護(hù)基、催化肽鍵合成、脫保護(hù)基三步構(gòu)成的完整合成工藝路線,并對(duì)主要酶促合成工藝條件進(jìn)行了分析優(yōu)化;在此基礎(chǔ)上,引入CLEA技術(shù),對(duì)合成中涉及的兩種重要酶制劑——木瓜蛋白酶和青霉素G?;高M(jìn)行新型固定化酶技術(shù)開發(fā),優(yōu)化制備條件,考察催化性質(zhì),表征形貌結(jié)構(gòu):同時(shí),開展CLEA微囊化方法的探索研究,為丙谷二肽的高收率、低成本制備提供有益參考,主要研究結(jié)果如下:酶促合
2、成丙谷二肽:以木瓜蛋白酶和青霉素G?;笧橹饕磻?yīng)用酶,成功制得丙谷二肽;全套反應(yīng)由引入保護(hù)基、木瓜蛋白酶酶促肽鍵合成和青霉素G酰化酶催化脫保護(hù)三步構(gòu)成,各步反應(yīng)收率最終為86.41%,30.5%和94.8%,總收率為24.98%。;合成過程中,采用HPLC-MS、核磁等手段對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)鑒定;同時(shí),開發(fā)了以制備色譜為主的目標(biāo)物分離提純方法。木瓜蛋白酶催化ph觚.舢a(chǎn).Gln的合成:反應(yīng)由動(dòng)力學(xué)控制,通過優(yōu)化工藝條件,得出在pH8.8,25℃,助溶劑乙醇添加量為1.5mL,游離酶濃度O.02g/mL,GlIl濃度O.5mo兒,Pllac.ma旬Me濃度0
3、.05mo兒,添加KCI濃度為O.1mo兒,反應(yīng)160I血情況下,合成苯乙?;Wo(hù)的丙谷二肽收率最高,可達(dá)30.5%;將木瓜蛋白酶CLEA應(yīng)用于反應(yīng),15h時(shí)收率為9.32%:針對(duì)CLEA技術(shù)應(yīng)用中存在的顆粒較小,不利于工業(yè)化應(yīng)用的問題,提出囊化解決方案,制得6種木瓜蛋白酶CLEA微囊,對(duì)結(jié)構(gòu)性質(zhì)進(jìn)行表征,其中實(shí)心海藻酸鈣微囊酶活保留最高,達(dá)53.42%。青霉素G?;复呋摫Wo(hù)基生成舢a(chǎn).Gln:將青霉素G?;赣坞x酶應(yīng)用于A1aGhl的合成,反應(yīng)0.33h,悼達(dá)94.8%;制備得到青霉素G酰化酶CLEA,優(yōu)化條件為:飽和硫酸銨溶液為沉淀劑,與酶液體積
4、比為2.3:l時(shí)為最適用量,戊二醛為交聯(lián)劑,濃度0.35%,交聯(lián)時(shí)間為2h,溫度4℃,最終酶活保留可達(dá)52.61%;所得CLEA的最適溫度與游離酶相比提高了10℃,因此可以在較高溫度下應(yīng)用;最適pH與游離酶相比向堿性偏移了兩個(gè)單位,適用范圍拓寬:熱失活研究表明,高溫下青霉素G酰化酶CLEA的熱穩(wěn)定性比游離酶明顯提高,反應(yīng)1.0h,收率為95.6%:實(shí)驗(yàn)制得兩種青霉素G酰化酶CLEA微囊,其中中空微囊酶活保留可達(dá)16.84‰機(jī)械強(qiáng)度最高可達(dá)7.95N:將青霉素G酰化酶CLEA微囊應(yīng)用于反應(yīng),2.2h時(shí),收率為95.2%。關(guān)鍵詞:丙谷二肽、酶促肽合成、cLE
5、A、cLEA微囊ABSTRACTInt11ispaper,eIlzymatics),Iltllesisof砧a.Gln砌chisaniInponantabentericnutritiousdmgwasconsiderdastllecoreof廿leresearch.ThesyntheticroutemcludmgproteCtioIl,enzymatic拶nthesisofdepeptideanddeprotectionwasSuccessmllydeVeloped.0ntllatbasis,CLEAtechnologywasappliedtothepa
6、paillandPG氣bothofthemarekeyeI珂mesiIlsyntlletiziIlg燦a如lILTheconditionsofpreparingCLEAWIereoptiIIlized,thepropeniesofCLEA、ⅣerestudiedaJldthe咖c仃ueofCLEAwasalsoc11amCterized.F0r$nthesiZiIlgAlaGln誦th11i曲yieldand】owcost,CLEAmicfocapsules11aVealsobeenexploreda11dStudied.Theconclusionsca
7、nbedmwnasfbllows:EⅡ巧maticsynthesisof舢a(chǎn)-Gh:Ala如ln吼ssuccessmllysymhesizedbyusingpapain觚dPGA.ThereactionscanbediVidediIno3st印si11cludiIlgprotectioIl’peptidesyntllesisbypapain觚duIlprotectionbyPGA.Theyieldsofthe3Steps眥e86.41%,30.5%鋤d94.8%respectively.The丘mlyieldwas24.98%.HPLC-MSandNMR
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