hiwi基因在肝癌發(fā)生中的機(jī)制研究

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1、分類號(hào)：Ｒ３４單位代碼：１０６７８?。崳妼W(xué)號(hào)；２０１２０２５巧級(jí)見(jiàn)略Ｓ種Ａ常碩±學(xué)位論義Ｈｉｗｉ基因在肝痛發(fā)生中的化制研究院（系）所昆巧民科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院硏究生姓名劉并學(xué)科、專業(yè)橘巧堂與病巧牛學(xué)學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位巧導(dǎo)教師童宗德救授二〇—五年五月尾４ｉｌ種欠常碩±學(xué)位論文Ｈｉｗｉ基因在肝癌發(fā)生中的機(jī)制研究研巧生姓名劉弁學(xué)科、專業(yè)病巧學(xué)與病理生理學(xué)申請(qǐng)學(xué)位類型科學(xué)學(xué)化指導(dǎo)教師章宗籍教授指導(dǎo)小組教師宰瞧敎?zhǔn)冢墸崳娡瓿扇掌冢牰选迥晡逶拢崳婓劭纾榉N於聲研究生學(xué)位絶文研宛撰寫聲明

2、本人鄭重聲明：本學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行學(xué)位課題研究所取得的研究成果。論文中除特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，不包含他人或其他機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。對(duì)本研巧和論文做過(guò)貢獻(xiàn)的同道我均在論文中作了明確的說(shuō)明并表明謝意，。該學(xué)位論文資料若有不實(shí)之處本人愿承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。）論文作者（簽名：分ｉＴ年６月Ｉ曰堯種欠掌研巧生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書、本學(xué)位論文作者完全了解昆明醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部ｎ或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？晒颊撐牡娜炕虿糠?/p>

3、內(nèi)容（確屬保密內(nèi)容已注明，并在解密后遵守此規(guī)定）；學(xué)?？刹捎糜坝?、縮印或其他手段保存本學(xué)位論文。學(xué)位論文作者））（簽名指導(dǎo)教師嚇■玉年６月ｆ日心。年／月Ｉ日＂本人及導(dǎo)師同意將學(xué)位論文提交至清華大學(xué)中國(guó)學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電’’子雜志社進(jìn)行電子和網(wǎng)絡(luò)出版，并編入ＣＮＫＩ系列數(shù)據(jù)庫(kù)，傳播本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，同意按《中國(guó)優(yōu)秀博碩±學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)出版章程》規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。＇—＾學(xué)位論文作者（簽名）：ｙ：）指導(dǎo)教師（簽名）—年＾月）曰心（Ｊ年Ｉ？月曰ｆ目錄一、中文摘要１二、英文摘要３Ｈ、論文６６

4、前ａ材料和方法８實(shí)驗(yàn)材料８實(shí)驗(yàn)方法１２鄉(xiāng)２５３８結(jié)４３參考文獻(xiàn)４４綜述４８一５５附錄：縮略詞表附錄二；攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況５６ａ：ｍ５７昆明醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文Ｈｉｗｉ基因在肝癌發(fā)生中的機(jī)制研巧碩壬生：劉巧導(dǎo)師：章宗籍教授指導(dǎo)教師：李瞧教授中文摘要一ｉｗｉ，又稱為ＰｌｌＰｉｗｉｉｗｉ目的：Ｈ蛋白ｉｗｉ蛋白，是人類蛋白家族中的員。Ｈ基因己被報(bào)道在食管癌、胃癌、膜腺癌、肝癌等多種癌癥組織中表達(dá)增高，但在肝癌中Ｈｉｗｉ的表達(dá)改變是巧癌發(fā)生的原因還是結(jié)果目

5、前并不明確。本研巧著重探討陸ｗｉ基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的増殖、遷移和稠ｔ的影響，并對(duì)其作用的分子機(jī)制進(jìn)行初步探索。方法：１．首先克隆人陸ｗｉ基因，構(gòu)建了曲ｗｉ表達(dá)質(zhì)粒。巧Ｈｉｗｉ表達(dá)質(zhì)粒及對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人肝癌ＨｅｐＧ２細(xì)胞株。采用ＭＴＴ實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活性變化，破化丙惦染色方法進(jìn)行細(xì)胞周期分析，同時(shí)通過(guò)Ｅｄｕ染色鑒定細(xì)胞增殖。采用ｔｒａｎｓｗｅｌｌ遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ＨｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｉｗｉ對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響。采用ｒ的方法檢測(cè)了ＥＭＴ相關(guān)基因的ｍＲＮＡ表達(dá)水平。２．建立了小鼠原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)，構(gòu)建了帶有ＧＦＰ標(biāo)記的表達(dá)人Ｈｉｗｉ的重姐腺病毒，感染

6、ＨｅｐＧ２細(xì)胞和原代肝細(xì)胞，再用ｐｅｒｉｆｏｒｓｉｎｅ或?qū)σ铱岚保崳娀遥ǎ粒校粒校┱T導(dǎo)細(xì)胞調(diào)ｔ采用ＭＴＴ方法檢測(cè)細(xì)胞活性變化同時(shí)對(duì)ＡＰＡＰ處理的ＨｅｐＧ２細(xì)胞進(jìn)行ＴＵＮＥＬ染色鑒定細(xì)胞調(diào)亡情況。３．通過(guò)小鼠尾靜脈注射腺病毒構(gòu)建巧臟過(guò)表達(dá)Ｈｉｗｉ的在體模型，病毒注射后５ｄ檢測(cè)肝臟組織中Ｈｉｗｉ的表達(dá)、調(diào)亡相關(guān)基因和ＥＭＴ相關(guān)基因的ｍＲＮＡ水平。小鼠尾靜脈注射腺病毒后，再腹腔注射ＡＰＡＰ建立急性肝損傷模型，檢測(cè)Ｈｉｗｉ的表達(dá)對(duì)ＡＰＡＰ引起的小鼠肝損傷的影響，同時(shí)檢測(cè)過(guò)表達(dá)Ｈｉｗｉ的小鼠肝臟和原代肝細(xì)胞中ＤＮＡ甲基化的水平。；１．成功克隆了人Ｈｉ

7、ｗ結(jié)果ｉ基因，構(gòu)建了Ｈｉｗｉ表達(dá)質(zhì)粒和腺病毒。通過(guò)ＭＴＴ、細(xì)胞周期檢測(cè)和ＥｄＵ標(biāo)記方法，發(fā)現(xiàn)陸ｗｉ基因的表達(dá)不能促進(jìn)ＨｅｐＧ２肝１昆明醫(yī)科大學(xué)碩±研巧生學(xué)位論文癌純胞和原代肝細(xì)胞的增殖。過(guò)表達(dá)陸ｗｉ細(xì)胞的遷移能力和上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化（ＥＭＴ）相關(guān)基因的表達(dá)也無(wú)明顯改變。２．我們觀察了Ｈｉｗｉ的表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞調(diào)亡的影響，發(fā)現(xiàn)陸ｗｉ對(duì)ｐｅｒｉｆｏｒｓｉｎｅ或?qū)σ铱岚被遥ǎ粒校粒校┱T導(dǎo)的細(xì)胞調(diào)亡無(wú)抑制作用。３．成功構(gòu)建了Ｈ，ｉｗｉ表達(dá)的腺病毒用尾靜脈注入腺病毒方法建立了肝臟高表達(dá)Ｈｉｗｉ的小鼠