hiwi基因在肝癌發(fā)生中的機制研究

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1、分類號：Ｒ３４單位代碼：１０６７８！學號；２０１２０２５巧級見略Ｓ種Ａ常碩±學位論義Ｈｉｗｉ基因在肝痛發(fā)生中的化制研究院（系）所昆巧民科大學基礎醫(yī)學院硏究生姓名劉并學科、專業(yè)橘巧堂與病巧牛學學位類型科學學位巧導教師童宗德救授二〇—五年五月尾４ｉｌ種欠常碩±學位論文Ｈｉｗｉ基因在肝癌發(fā)生中的機制研究研巧生姓名劉弁學科、專業(yè)病巧學與病理生理學申請學位類型科學學化指導教師章宗籍教授指導小組教師宰瞧敎授完成日期二Ｑ—五年五月筵跨ｉ種於聲研究生學位絶文研宛撰寫聲明

2、本人鄭重聲明：本學位論文是我本人在導師指導下，獨立進行學位課題研究所取得的研究成果。論文中除特別加Ｗ標注和致謝的地方外，不包含他人或其他機構已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本研巧和論文做過貢獻的同道我均在論文中作了明確的說明并表明謝意，。該學位論文資料若有不實之處本人愿承擔一切相關責任。）論文作者（簽名：分ｉＴ年６月Ｉ曰堯種欠掌研巧生學位論文版權使用授權書、本學位論文作者完全了解昆明醫(yī)科大學有關保留使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部ｎ或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。學?？晒颊撐牡娜炕虿糠?/p>

3、內容（確屬保密內容已注明，并在解密后遵守此規(guī)定）；學?？刹捎糜坝?、縮印或其他手段保存本學位論文。學位論文作者））（簽名指導教師嚇■玉年６月ｆ日心。年／月Ｉ日＂本人及導師同意將學位論文提交至清華大學中國學術期刊（光盤版）電’’子雜志社進行電子和網絡出版，并編入ＣＮＫＩ系列數據庫，傳播本學位論文的全部或部分內容，同意按《中國優(yōu)秀博碩±學位論文全文數據庫出版章程》規(guī)定享受相關權益。＇—＾學位論文作者（簽名）：ｙ：）指導教師（簽名）—年＾月）曰心（Ｊ年Ｉ？月曰ｆ目錄一、中文摘要１二、英文摘要３Ｈ、論文６６

4、前ａ材料和方法８實驗材料８實驗方法１２鄉(xiāng)２５３８結４３參考文獻４４綜述４８一５５附錄：縮略詞表附錄二；攻讀學位期間發(fā)表文章情況５６ａ：ｍ５７昆明醫(yī)科大學碩±研巧生學位論文Ｈｉｗｉ基因在肝癌發(fā)生中的機制研巧碩壬生：劉巧導師：章宗籍教授指導教師：李瞧教授中文摘要一ｉｗｉ，又稱為ＰｌｌＰｉｗｉｉｗｉ目的：Ｈ蛋白ｉｗｉ蛋白，是人類蛋白家族中的員。Ｈ基因己被報道在食管癌、胃癌、膜腺癌、肝癌等多種癌癥組織中表達增高，但在肝癌中Ｈｉｗｉ的表達改變是巧癌發(fā)生的原因還是結果目

5、前并不明確。本研巧著重探討陸ｗｉ基因對肝癌細胞的増殖、遷移和稠ｔ的影響，并對其作用的分子機制進行初步探索。方法：１．首先克隆人陸ｗｉ基因，構建了曲ｗｉ表達質粒。巧Ｈｉｗｉ表達質粒及對照質粒轉染人肝癌ＨｅｐＧ２細胞株。采用ＭＴＴ實驗檢測細胞活性變化，破化丙惦染色方法進行細胞周期分析，同時通過Ｅｄｕ染色鑒定細胞增殖。采用ｔｒａｎｓｗｅｌｌ遷移實驗檢測ＨｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｉｗｉ對細胞遷移能力的影響。采用ｒ的方法檢測了ＥＭＴ相關基因的ｍＲＮＡ表達水平。２．建立了小鼠原代肝細胞的培養(yǎng)，構建了帶有ＧＦＰ標記的表達人Ｈｉｗｉ的重姐腺病毒，感染

6、ＨｅｐＧ２細胞和原代肝細胞，再用ｐｅｒｉｆｏｒｓｉｎｅ或對乙酷氨基酪（ＡＰＡＰ）誘導細胞調ｔ采用ＭＴＴ方法檢測細胞活性變化同時對ＡＰＡＰ處理的ＨｅｐＧ２細胞進行ＴＵＮＥＬ染色鑒定細胞調亡情況。３．通過小鼠尾靜脈注射腺病毒構建巧臟過表達Ｈｉｗｉ的在體模型，病毒注射后５ｄ檢測肝臟組織中Ｈｉｗｉ的表達、調亡相關基因和ＥＭＴ相關基因的ｍＲＮＡ水平。小鼠尾靜脈注射腺病毒后，再腹腔注射ＡＰＡＰ建立急性肝損傷模型，檢測Ｈｉｗｉ的表達對ＡＰＡＰ引起的小鼠肝損傷的影響，同時檢測過表達Ｈｉｗｉ的小鼠肝臟和原代肝細胞中ＤＮＡ甲基化的水平。；１．成功克隆了人Ｈｉ

7、ｗ結果ｉ基因，構建了Ｈｉｗｉ表達質粒和腺病毒。通過ＭＴＴ、細胞周期檢測和ＥｄＵ標記方法，發(fā)現陸ｗｉ基因的表達不能促進ＨｅｐＧ２肝１昆明醫(yī)科大學碩±研巧生學位論文癌純胞和原代肝細胞的增殖。過表達陸ｗｉ細胞的遷移能力和上皮細胞向間質細胞的轉化（ＥＭＴ）相關基因的表達也無明顯改變。２．我們觀察了Ｈｉｗｉ的表達對肝細胞調亡的影響，發(fā)現陸ｗｉ對ｐｅｒｉｆｏｒｓｉｎｅ或對乙酷氨基敢（ＡＰＡＰ）誘導的細胞調亡無抑制作用。３．成功構建了Ｈ，ｉｗｉ表達的腺病毒用尾靜脈注入腺病毒方法建立了肝臟高表達Ｈｉｗｉ的小鼠