資源描述：
《豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品的研制及定值方法研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、密級(jí)：無論文編號(hào)：82110-2012-06中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所碩士學(xué)位論文豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品的研制及定值方法研究TheResearchAndEvaluationofReferenceStandardofPorcineCircovirusType2InactivatedVaccine(課題來源十二五”科技基礎(chǔ)性工作專項(xiàng)重點(diǎn)項(xiàng)目編號(hào)：2013FY113300-3)研究生：王曉卉指導(dǎo)教師：王在時(shí)研究員申請(qǐng)學(xué)位類別:農(nóng)學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：獸醫(yī)微生物與免疫學(xué)位授予單位:中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所2015年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明木人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，
2、是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)K，進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的閃容外，本學(xué)位論文的研究成果不包含任何他人創(chuàng)作的、己公開發(fā)表或者沒有公開發(fā)表的作品的內(nèi)容，也不包含為獲得中國(guó)獸丨欠:藥品監(jiān)察所或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。對(duì)本論文所涉及的研究工作做出貢獻(xiàn)的其他個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明的法律責(zé)任巾木人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：I%4w//年r月/rn關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：中監(jiān)所有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或彳
3、H描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)獸民藥品監(jiān)察所可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。(保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）研究生簽名：時(shí)間：>//年及月/」'日時(shí)間：年《月/r日中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所碩士學(xué)位論文摘要摘要豬圓環(huán)病毒2型（PorcineCircovirusType2，PCV2）是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(post-weaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)等疾病的主要病原，給不少豬場(chǎng)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為防控豬圓環(huán)病毒病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部自2010年批準(zhǔn)了首個(gè)豬圓環(huán)病毒疫苗
4、豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（SH株）之后，兩年間又先后批準(zhǔn)了LG株、DBN-SX07株、WH株和ZJ/C株全病毒滅活疫苗。截至目前，我國(guó)共批準(zhǔn)了5個(gè)毒株的豬圓環(huán)病毒滅活疫苗，分別由16家生物制品企業(yè)生產(chǎn)。然而各個(gè)毒株疫苗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的效力檢驗(yàn)方法均不相同，許多疫苗仍在用傳統(tǒng)的豬檢法進(jìn)行檢驗(yàn)，面臨著篩豬難且試驗(yàn)費(fèi)時(shí)費(fèi)力的問題，這勢(shì)必造成檢驗(yàn)監(jiān)督機(jī)構(gòu)在疫苗檢測(cè)、監(jiān)督和規(guī)范化管理的實(shí)施上難度加大，同時(shí)，SH株疫苗效力檢驗(yàn)應(yīng)用的小鼠免疫試驗(yàn)法雖最為簡(jiǎn)便快速，但缺乏規(guī)范化的參考品供應(yīng)。因此，我們需要盡快研制出豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品，為該類疫苗檢驗(yàn)提供一把準(zhǔn)確可靠的標(biāo)
5、尺，規(guī)范疫苗的質(zhì)量。本研究選擇質(zhì)量符合要求的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（SH株）成品作為該參考品的候選物，無菌分裝于西林瓶中制備出該參考品，并對(duì)其各項(xiàng)特性值進(jìn)行了測(cè)定，均符合要求。同時(shí)，對(duì)該參考品進(jìn)行了仔豬攻毒試驗(yàn)，驗(yàn)證了參考品的保護(hù)效力，建立了參考品替代方法與傳統(tǒng)方法的相關(guān)性，證明了該參考品可以作為PCV2滅活苗質(zhì)量控制的實(shí)物標(biāo)尺。隨后，為了建立更加客觀準(zhǔn)確的疫苗效力檢驗(yàn)體外替代方法，本研究摸索了該參考品進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)時(shí)應(yīng)用的最佳破乳方法，建立了進(jìn)行豬圓環(huán)病毒2型病毒定量檢測(cè)的熒光定量PCR方法，對(duì)其反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證，并探索了該方法作為疫苗效力
6、檢驗(yàn)替代方法的可行性。結(jié)果表明，直接檢測(cè)疫苗破乳水相中的病毒核酸拷貝數(shù)與小鼠免疫試驗(yàn)法測(cè)定結(jié)果之間具有高度相關(guān)性，該方法作為參考品效力檢驗(yàn)替代方法具有很強(qiáng)的可行性。此外，針對(duì)各毒株疫苗效檢方法各不相同的問題，本研究還對(duì)該參考品對(duì)其它毒株產(chǎn)品應(yīng)用小鼠免疫試驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)的參考覆蓋性進(jìn)行初步探索，以期將使該參考品成為多種毒株疫苗質(zhì)量控制的通用標(biāo)尺，但初步結(jié)果表明以當(dāng)前的方法，該參考品不具有參考覆蓋性，其正確應(yīng)用方法尚待進(jìn)一步研究和驗(yàn)證。最后，為獲得更加準(zhǔn)確的定值結(jié)果，組織了包括本實(shí)驗(yàn)室在內(nèi)的4家單位進(jìn)行協(xié)作標(biāo)定，通過對(duì)各家試驗(yàn)原始數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，將各單位測(cè)定的不
7、確定度引入到定值結(jié)果中，完成了豬圓環(huán)病毒2型滅活苗參考品的最終定值。關(guān)鍵詞：豬圓環(huán)病毒2型滅活苗，參考品，仔豬攻毒試驗(yàn)，熒光定量PCR，協(xié)作標(biāo)定I中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所碩士學(xué)位論文ABSTRACTABSTRACTPorcineCircovirusType2(PCV2)isthemainpathogenofpost-weaningmultisystemicwastingsyndrome(PMWS),whichhascausedsevereeconomiclossestotheswineindustry.Topreventandcontrolthecontagio
8、nofPCV2,theMinistryofAgriculturea
