豬源2009甲型h1n1流感病毒的分離鑒定及其致病性的研究

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1、..M:.,巧古學(xué)化化義豬源2009甲型H1N1流感病毒的分離鑒定及其致病性的研究吳軍?..爲(wèi)爲(wèi)乂學(xué)二〇—五年六月分類號(hào)WJrt寺密級(jí)傷巧UDC義碩古學(xué)位論文猜源2009甲型H1N1流感病毒的分離鑒定及其致病性的研究吳軍學(xué)科專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師劉義軍研究員劉棋研究員熊毅研究員^論文答辯日期三〇l、t年女曰巧曰學(xué)位授予日期從膊M如答辯委員會(huì)主席啼槪獄鮮廣西大學(xué)學(xué)位論文原倒性和使用授枚靑明本人聲明所呈交的論文,是本人在導(dǎo)師的指

2、導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行硏究所取得。1的研究成果除已特別加^標(biāo)注和致謝的地方外,論文不包含任何其他個(gè):人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果,也不包含本人或他人為獲得廣西大一學(xué)或其它單位的學(xué)位而使用過(guò)的材料。與我同工作的同事對(duì)本論文的研究工作所做的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確說(shuō)明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學(xué)位論文及相關(guān)的職務(wù)作品,知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸。:屬?gòu)V西大學(xué)本人授權(quán)廣西大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán),即學(xué)校有權(quán)保存并向國(guó)家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版,允許論レ文被查閱和借閱,可ッ將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編

3、入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行。檢索和傳播,可采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文本學(xué)位論文屬于;□保密,在年解密后適用授權(quán)。保密。""(請(qǐng)?jiān)冢咨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打V)論文作者簽名;奚罕曰期;^氣么‘fc指導(dǎo)教師簽名:乏脅日期cH:、j:作者聯(lián)系電話:電子郵箱豬源2009甲型H1N1流感病毒的分離鑒定及其致病性的硏究摘要2009年3月新甲型H1N1流感病毒在墨西哥暴發(fā),同年4月第1株2009甲2009甲型H1N1型H1N1流感病毒被分離,之后有越來(lái)越多的報(bào)道表明流感病。

4、2009甲型H1N1流感病毒是混合了豬源流毒可W由人向豬傳播研究證明,感病毒、禽源流感病毒和人源流感病毒H者特征的重組病毒,給養(yǎng)豬業(yè)帶。1N1流感病毒來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失,也對(duì)人類的健康構(gòu)成威脅因此對(duì)豬群中H?進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和監(jiān)測(cè)具有重要的公共衛(wèi)生意義。本實(shí)驗(yàn)從2013年1月2014年12月對(duì)廣西省部分養(yǎng)豬場(chǎng)及發(fā)病豬群進(jìn)行樣品采集和病毒的分離,目的為研究該區(qū)域豬群中流行的流感病毒亞型、變異規(guī)律和發(fā)病情況,為豬流感的研究和防控提供參考。實(shí)驗(yàn)成果如下:1.從發(fā)病豬群分離鑒定得到12株H1N1亞型豬流感病毒

5、,其中1株為200920?甲型H1N1流感病毒。本研究從13年1月2014年12月采集至廣西8?jìng)€(gè)市?(地區(qū)1609份進(jìn)行病毒分離。經(jīng)911日齡SPF)發(fā)病豬群的豬紐織病料共RT-PC民的方法對(duì)雞胚分離得到12株豬流感病毒株。運(yùn)用12株病毒的HA和11N11NA基因進(jìn)行擴(kuò)增和序列測(cè)定分析,鑒定2株病毒均為H亞型,其中株為2009甲型H1N1流感病毒。將這株豬源2009甲型H1N1流感病毒株作為本實(shí)驗(yàn)研究的對(duì)象,并命名為A/swine/Guangxi/18/2013(HlNl)。2.遺傳進(jìn)化分析表明分

6、離株8?jìng)€(gè)基因片段與其他2009甲型H1N1流感一。對(duì)A/swxi/18/2013HlNl全基因組的8?jìng)€(gè)病毒的進(jìn)化關(guān)系致ine/Guang()I-、A基因片段進(jìn)行民TPC民擴(kuò)增克隆及序列測(cè)定,運(yùn)用Melin軟件進(jìn)行核gg昔酸和氨基酸的比較分析,再通過(guò)MEGA5.0軟件構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)。進(jìn)化分2009一析結(jié)果表明分離株與甲型H1N1流感毒株處于同個(gè)進(jìn)化枝,與A0409一/Califomia//20閑1N1親緣關(guān)系很近,起源于同祖先。其基因來(lái)源情)況為:HA、NS和NP基因來(lái)源于古典型H1N1豬源譜系,N

7、A和M基因來(lái)源于類禽型H1N1豬源譜系,PA和PB2基因來(lái)源于禽源譜系,PB1基因來(lái)源于H3N2人源譜系。分離株8?jìng)€(gè)基因片段在抗原位點(diǎn)、受體結(jié)合位點(diǎn)、、糖基化位點(diǎn)W及耐藥性位點(diǎn)等多處氨基酸發(fā)生了變異,表明其抗原特性宿主適應(yīng)性、致病力及抗藥性發(fā)生了變化。3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)分離株對(duì)BALB/C小鼠具有致病性。對(duì)BALB/C小鼠的攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示病毒可感染小鼠,并能在肺臟與鼻甲骨組織中進(jìn)行有效復(fù)制,感染小鼠后引起明顯的臨床癥狀,體重迅速下降造成小鼠平均體重最局降幅為13.02%。關(guān)鍵詞:豬源甲型H

8、1N1流感病毒分離鑒定進(jìn)化分析致病性IIOLATION-ISANDIDENTIFICATIONOFSWINEORIGIN2009PANDEMICHlNlINFLUENZ乂乂VIRUSANDITSPATHOGENICITYABSTRACTInMa

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