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《地塞米松對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、蘭州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文地塞米松對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化的影響姓名：劉杰申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（骨外）指導(dǎo)教師：孫正義;王栓科2003.4.1蘭州醫(yī)學(xué)院fi6111學(xué)位論義地塞米松對骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化的影響摘要目的分離培養(yǎng)并鑒定小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞：研究地塞米松對體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化的影響。方法分離j～7周齡昆明小鼠雙側(cè)股骨，用預(yù)冷的IMDM培養(yǎng)基沖洗出瞥髓，采用全骨髓培養(yǎng)法，以1×104個(gè)／cm?接種于25ml培養(yǎng)瓶內(nèi)。接種約6～q天后，形成單層貼壁成纖維狀細(xì)胞，覆蓋培葬瓶壁約70％～80％的面積。用葛三代傳代細(xì)胞行各種組織特異性染色，進(jìn)行培
2、養(yǎng)細(xì)胞的鑒定以及進(jìn)行細(xì)胞生長曲線的測定。在此基礎(chǔ)上，在培養(yǎng)基內(nèi)添加l×10“mol／乙的地塞米松，將細(xì)胞置入CO：孵箱中培養(yǎng)，同時(shí)做不加藥的空白對照。通過倒鼉相差顯微鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化情況，檢測上清液中堿性磷酸酶和骨鈣索含量。結(jié)果用全骨髓培養(yǎng)法獲得的細(xì)胞，行各種組織特異性染色后證實(shí)，該細(xì)胞非脂肪細(xì)胞、非軟骨細(xì)胞、非成骨細(xì)胞、非成纖維細(xì)胞。經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后，方具有成骨細(xì)胞特性。所以可斷定，本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。由生長曲線可知，加入1×10“mol／L地塞米松后，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的倍增時(shí)間，由36h延長為54h。進(jìn)一步研究表明，在地塞米松濃度為l×10一mol
3、／L，骨髓闖充質(zhì)干細(xì)胞密度為l×105／ml的培養(yǎng)條件，上清液中堿性磷酸酶(實(shí)驗(yàn)組分別為：2．96+0．07，3．12±O．16，3．23±O．27，4．47±0．31，6．21±O．14：對照組分別為1．07±0．23，I．13±0．12，1．34±0．25，1．70_0．18．!11±O．24)和骨鈣素(實(shí)驗(yàn)組分別為：未測出，O．42±0．10，0．57±0．2，蘭州阪學(xué)院碩．卜學(xué)位論史o．84±o．13，1．36±o．31：對照組分別為：未測出，未測出，未測出，未測出，未測出)含量增加，骨結(jié)節(jié)形成加速，與未加藥的對照組相比均統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)條件下，可以通過全
4、骨髓培養(yǎng)法獲得骨髓間充質(zhì)二r細(xì)胞。該細(xì)胞體外生長穩(wěn)定．傳代后細(xì)胞適應(yīng)性強(qiáng)，增殖較快，具有向成骨細(xì)胞分化的潛能。地塞米松抑制了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖，延長了細(xì)胞倍增時(shí)間。但是，它可以促進(jìn)其向成骨細(xì)胞其分化，大量表達(dá)成骨細(xì)胞特異性物質(zhì)(ALP，OCN)，并且隨著培育時(shí)間的延長，促進(jìn)鈣質(zhì)沉著，迅速形成骨結(jié)節(jié)。關(guān)鍵詞細(xì)胞培養(yǎng)，種子細(xì)胞，地塞米松，骨髓間充質(zhì)于細(xì)胞分化，增殖蘭¨{限學(xué)院娥{：學(xué)位論文Theeffectsofdexamethasoneonbiologicalcharacteristicsofbonemesench3，realstemcellsAbstraetobjectiv
5、eTocultureandidentifymicemesenchymalstemcellsfMSCs)．Theeffectsofdexamethasoneonthemesenchyrealstemceilsproliferationanddif·feremiatiohinvitrowereobservedandanalyzed．MethodsAfterthefemursweredissectedfrom5to7．week．oldmites．thebonenlalTov,wasflushedOUtwitllice·coldIMDMmedium．TheeelJwasplatedin
6、25mlcultureplateatl×l釅／mlandcultured蛀llt醞fibroblast-shapedcellsco、，ered60％一70％oftheculturedplatedafter6to8-day．The3rdpassengerwasstained磅tissuespeeifieialstaininginordertoidentifyculturedceils，andthecellgrowthCUlWewasobserved．The3rdpassagercellswereincubatedundertheconditionof37"C．95％relativ
7、ehumidityand5％C02．Subsequently，lx10喀mol／Ldexamethasone
8、‘。asaddedintoculturemediumtofeedagroupofmesenc-hymalstemcellsandthecomrolgroupswerecultured、vithomthemedicineatthesametime。Thedifferentiationandproliferationofthegroupswereobsen，edcontinuall3’u
