資源描述：
《長期施肥對土壤水解酶活性的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、長期施肥對土壤水解酶活性的影響杜文釗研究意義：施肥是影響土壤質量演化及其可持續(xù)利用最為深刻的農業(yè)措施之一。過去人們關于施肥對土壤物理、化學性質及其環(huán)境的影響效應做了大量研究。近20年來，土壤的生物學特性在土壤肥力與質量中作用的研究得到不斷加強。前人研究認為施用有機肥料可以顯著地提高土壤微生物量碳、氮的含量以及土壤酶活性，并且隨著有機肥施用量的增大，效果越明顯。施用化學肥料也有提高土壤微生物量的效應，但過量的施用化肥(氮磷鉀)，降低了土壤微生物量碳的含量。但前人的研究大多集中在施用化肥或有機肥對一種或兩
2、種土壤微生物學指標的影響，而在我國系統(tǒng)的研究長期施用化肥、有機肥、秸稈還田以及輪作等措施對土壤生物量、土壤呼吸和土壤酶活性等多種土壤生物學指標影響較少，特別是以長期試驗為平臺，研究長期撂荒與種植作物對土壤微生物學特性的影響更少。因此本次實驗是研究長期肥制度對土壤生物學特性的影響，為建立合理施肥制度，提高土壤質量和實現土壤可持續(xù)利用提供理論依據。土壤酶是由微生物，動植物活體分泌及由動植物殘體，遺骸分解釋放于土壤中物質，能量代謝旺盛程度和土壤質量水平的一個重要生物指標。土壤水解酶是催化土壤中各種底物發(fā)生水
3、解反應的酶類，通過裂解有機化合物中糖苷鍵，脂鍵，肽鍵，酸酐鍵以及其他鍵，直接參與土壤中有機物的轉化。土壤水解酶測定方法：茚三酮比色法。試劑：甲苯，白明膠，甘氨酸，濃硫酸，硫酸鈉，茚三酮儀器：分光光度計，50ml三角瓶，50ml容量瓶，恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋試劑配制：1磷酸鹽緩沖溶液(pH7.4)配制：a：0.2mol磷酸二氫鈉溶液：稱取27.6gNaH2PO4·H2O溶至1L，0.2mol磷酸氫二鈉溶液：53.65gNa2HPO4·7H2O或71.7gNa2HPO4·12H2O溶至1L；取19ml0.2m
4、ol磷酸二氫鈉溶液加81ml0.2mol磷酸氫二鈉溶液，稀釋至200ml。2.1%白明膠溶液：稱取1g白明膠用磷酸鹽緩沖液溶至100ml；0.05mol/L硫酸：將1ml濃硫酸（比重1.84）稀釋至360ml。3.2%的茚三酮溶液：稱取2g茚三酮溶于100ml丙酮中為原液，使用時將95ml原液加1ml乙酸和4ml蒸餾水混合制成工作液(該工作液不穩(wěn)定，現用現配)。4.20%硫酸鈉溶液：稱取20g硫酸鈉用蒸餾水溶至100ml。5.甘氨酸標準液：稱取100mg甘氨酸用蒸餾水溶至1L(100微克/ml)。步驟
5、：1.2g土樣兩份置于三角瓶，加0.5ml甲苯，混勻放置15min，另取一三角瓶不加土樣和甲苯作為無土對照；2.?將其中一土樣試管加10ml1%白明膠，另一瓶加10ml蒸餾水代替明膠溶液作為無基質對照。蓋好瓶蓋，小心搖勻，在30攝氏度恒溫水浴鍋培養(yǎng)24h后過濾；3.?吸取濾液5ml于試管中，加0.5ml0.05mol/L硫酸和3ml20%硫酸鈉沉淀蛋白質，再次過濾；4.取濾液2ml加1ml2%的茚三酮溶液在試管中，于沸水浴上加熱10min，將顯色液稀釋至50ml。5.560nm比色測定6.甘氨酸標準曲
6、線的制作：分別吸取0、0.1、0.2、0.5、1.2和5ml甘氨酸標準液置試管中，加蒸餾水至5ml，各加入1ml2%的茚三酮溶液搖勻，在沸水浴上加熱10min，將顯色液轉入50ml容量瓶，稀釋至刻度，560nm以不含甘氨酸的溶液為對照比色測定。7.用干熱滅菌的土壤和不含土壤的基質（如石英砂）作對照，方法如前所述，以除掉土壤原有的氨基酸引起的誤差。換算成甘氨酸的量，根據用甘氨酸標液制取的標準曲線查知。標準曲線繪制：分別吸取0、1、3、5、7、9、11mL該工作液于50mL容量瓶中即獲得甘氨酸濃度分別為0
7、、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2μg?mL-1的標準溶液梯度，然后加入1mL?2％茚三酮溶液。沖洗瓶頸后將混合物仔細搖蕩，并在煮沸的水浴中加熱10min。將獲得的著色溶液用蒸餾水稀釋至刻度。在560nm處進行比色，最后繪制標準曲線。結果計算：?土壤水解酶的活性，以24h后1g土壤中甘氨酸的微克數表示。?甘氨酸（μg?g-1）＝?﹙c×50×ts﹚／m?甘氨酸（μg?g-1）－24小時后1g土壤中甘氨酸的微克數；??c－標準曲線上查得的甘氨酸濃度，μg?mL-1；??50－顯色液體積，m
8、L；??ts－分取倍數（這里是2＝10/5）；??m－土壤質量，g
