藥物分析》生化藥物分析

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1、第13章生物藥物分析概論本章主要內(nèi)容生物藥物種類與特點生物藥物質(zhì)量檢驗的基本程序與方法生物藥物理化測定法：HPLC法、酶法、電泳法一、概述1.生物藥物biopharmaceuticals利用生物體、生物組織和器官制得的天然活性物質(zhì)及其類似物分類沒有嚴格的界限主要包括：生化藥物生物制品（生物技術(shù)藥物）2.生化藥物biochemicaldrugs生命基本物質(zhì)及其衍生物等動植物及微生物提取、分離的天然生物活性物質(zhì)及半合成得到生化藥物氨基酸、Pr類酶、輔酶類多糖類脂類核酸類人纖維蛋白原凝血酶、胰蛋白酶肝素、玻璃

2、酸鵝脫氧膽酸、谷固醇3.生物制品biologicalproducts應用普通的或以基因工程、細胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料制備的藥品分類：菌苗、疫苗、類毒素免疫血清診斷制品其他（包括血液制品、組織制品等）自動免疫制品4.基因工程藥物biotechnologydrugs利用重組DNA等生物技術(shù)生產(chǎn)的藥物發(fā)現(xiàn)并確定有治療作用的Pr分離或合成控制該Pr合成的基因?qū)⒃摶驅(qū)胧荏w細胞受體細胞表達該Pr分離純化基因工程藥物胰臟(A)n胰島素原mRN

3、AcDNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細菌mRNA反轉(zhuǎn)錄酶胰島素原基因與質(zhì)粒連接感染E.coli胰島素原重組胰島素原的合成基因工程藥物主要類別蛋白質(zhì)多肽類：激素類及神經(jīng)遞質(zhì)類細胞因子類酶及凝血因子類核酸類：反義寡核苷酸等人生長激素釋放抑制因子（HumanSomatotin）干擾素（HumanInterferons）鏈激酶（Streptokinase）5.生化藥物和基因工程藥物特點1）共同特點：活性強，毒副作用小2）分子量大，結(jié)構(gòu)確證難3）全過程的質(zhì)量控制：從原料、菌種到生產(chǎn)設(shè)備、中間體、產(chǎn)品5）生物活性檢查6）安全性檢

4、查：異常毒性檢查、過敏物質(zhì)檢查、外源性DNA殘留量、宿主菌蛋白殘留量等7）效價（含量）測定二、檢驗的程序和方法收錄于《中國藥典》和《中國生物制品規(guī)程》程序和方法包括：鑒別、雜質(zhì)檢查、安全性檢查、含量（效價）測定1.鑒別1）理化鑒別法：UV、肽圖等反應序列信息RP-HPLC法分析重組人胰高血糖素類多肽－1（7－36）肽圖譜《藥物分析雜志》2005，25(1)24-26標準品樣品胰蛋白酶酶解V8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36)由30個氨基酸組成，結(jié)構(gòu)中含2Lys、1Arg、1Asp、3Glu2）生化鑒別

5、法：免疫法、酶法、電泳法等3）生物鑒別法：動物試驗等專屬性強，應用廣泛免疫雙擴散法SDS-PAGEMarkerSample116.0k66.2k45.0k35.0k25.0k18.4k14.4k2.雜質(zhì)檢查1）一般雜質(zhì)：氯化物、重金屬、水分等2）特殊雜質(zhì)：有關(guān)物質(zhì)等高效凝膠過濾色譜法(HighPerformanceGelFilter，HPGFC）、RP-HPLC萄聚糖凝膠立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)圖標準蛋白色譜圖時間(min)048121654321.右旋糖酐藍2.醛縮酶3.血清白蛋白4.碳酸酐酶5.抑蛋白酶肽6.酪

6、氨酸重組人腫瘤壞死因子相關(guān)調(diào)亡誘導配體（rhTRAIL）質(zhì)控方法和質(zhì)量標準的研究《藥物分析雜志》2005，25（3）253-257Synmetry300C18柱（3.9×150mm）3.安全性檢查1）熱原檢查家兔法、鱟試劑法2）降壓物質(zhì)檢查3）過敏試驗4）異常毒性試驗豚鼠、大鼠存活試驗5）無菌試驗6）宿主細胞蛋白殘留、DNA殘留ELISA法1）理化分析法：重量法、滴定法、電化學法、光譜法色譜法（HPLC法）4.含量（效價）測定例：蛋白質(zhì)含量測定（ChP2005三部）凱氏定氮法Lowry法雙縮脲法2）生化

7、分析法酶法：免疫分析法酶活力測定法以酶為分析對象進行分析酶分析法以酶為分析工具或分析試劑的分析方法3）生物檢定法藥物對生物體或離體器官所起的生物活性測定效價時采用參考品，體內(nèi)、體外方法測定活性，計算效價IU同時測定蛋白含量，計算特異比（比活性，IU/mg）例：凍干基因工程α1b干擾素制造及檢定規(guī)程本品系用從健康人白細胞中獲得的α1b干擾素基因重組質(zhì)粒，傳染大腸桿菌，使之高效表達人α1b干擾素，經(jīng)高度純化后凍干制成。用于治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛細胞白血病等疾病。主要包括以下內(nèi)容：1菌種2發(fā)酵3收菌4

8、菌體裂解與粗制干擾素制備5濃縮與純化6稀釋、除菌過濾7半成品檢定8除菌半成品檢定9成品檢定10規(guī)格11保存與效期12凍干基因工程α1b干擾素使用說明書檢查：純度：1電泳純度2高效液相色譜純度pH值水分鑒別：分子量測定肽圖測定等電聚集紫外光譜掃描外觀半成品和成品的檢驗項目包括：安全性檢查：殘余外源性DNA含量殘余IgG含量殘余工程菌蛋白含量抗生素活性無菌試驗熱原質(zhì)試驗異常毒性含量：效價測定：細胞病變抑制法蛋白含量比活性