雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)

《雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏實(shí)驗(yàn)隨著養(yǎng)雞業(yè)集約化、產(chǎn)業(yè)化的不斷發(fā)展，疾病越來越多，細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性越來越強(qiáng)，在臨床疾病防治工作中，要取得較好的治療效果，需要選擇對(duì)致病菌比較敏感的藥物來述行預(yù)防和治療，達(dá)到有效控制疾病的目的。為了控制雞大腸桿菌在雞群中的傳播，我們對(duì)送檢的疑似大腸桿菌病例迓行病原的分離鑒定，并對(duì)分離菌的培養(yǎng)特性、致病力及抗菌藥物的敏感性進(jìn)行了研究，為有效防制雞大腸桿菌病提供了依據(jù)。關(guān)鍵詞:大腸桿茵;分離鑒立;藥敏1材料1.1病料來源采自雞場(chǎng)150?200日齡有典型氣囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和敗血癥的病死蛋雞的肝臟、脾臟、心血等。1.2培養(yǎng)基普通瓊脂培養(yǎng)

2、基與普通肉湯培養(yǎng)基［LB培養(yǎng)基：固體：胰蛋白豚l(xiāng).Og加入酵母提取物0.5g、NaC10.5g,^瓊月粉1.5g使其充分溶解，高壓滅菌20min,鋪板并保存于4°C”。液體:胰蛋白月東l.Og加入0.5g酵母提取物、0.5gNaCl,然后定容至100ml,高壓火菌20min,4°C保存］麥康凱瓊脂培養(yǎng)某水解酪蛋白（MH）培養(yǎng)基三糖鐵瓊脂（蛋白腺20g,牛肉浸膏5g,乳糖10g,蔗糖10g,葡萄糖lg,NaCL5g,硫代硫酸鈉0.2g,硫酸亞鐵0.2g,瓊脂粉20g,加熱溶解后PH調(diào)至7.4加入（）.4%酚紅水溶液6.3ml蒸懈水定容1000ml,分裝牛5ml滅菌，制成

3、底層較深的斜血）胰蛋白月東水溶液（蛋白月東2.5g,NaCL1.25g,蒸館水250ml,PH調(diào)至7.6,分裝滅菌）葡荀糖蛋白腺水溶液（100mlpH7.6的鄧亨氏蛋白腺水屮加葡?萄糖lg,溶解后分裝lml每管，滅菌）1.3儀器與器材超凈工作臺(tái)，天平、接種環(huán)，平皿，試管，滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、離心機(jī)、細(xì)菌微量生化反應(yīng)器、pH計(jì)、旋渦混合振蕩器96孔板、滅菌試管、容量瓶、刻度吸管、接種環(huán)、移液器和吸頭等生化發(fā)酵管（葡萄糖、麥芽糖、甘蠱醇、乳糖、尿素分解管、硫化氫、枸稼酸鹽、賴氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、半固體瓊脂、蛋白豚水、木糖、葡萄糖磷酸鹽、山梨醇等）1.4藥物與試

4、劑瓊脂，肉湯，麥康凱瓊脂，95%酒精、甲基紅、a蔡酚酒精、氫氧化鉀、結(jié)品紫、草酸錢、碘化鉀、碘片、復(fù)紅、MH肉湯、MH瓊脂M?R試劑（用95%酒精60ml溶解0.02g甲基紅，定容100ml）V-P試劑（甲：5%a荼酚酒精溶液；乙：40%氫氧化鉀水溶液，裝于棕色瓶，4°C保存）草酸錢結(jié)晶紫染液（A液：結(jié)晶紫2g研細(xì)后加入95%酒精20ml使之溶解；B液：草酸錢lg溶于l（X）ml蒸鎘水，兩液混合）革蘭氏碘液（2g碘化鉀溶解于少量水中，加入lg碘片使之完全溶解，定容300ml）復(fù)紅染液（2.5ml復(fù)紅加100ml酒秸，取混合液10ml加80ml蒸憎水）2.大腸桿菌的分離

5、鑒定2.1大腸桿菌的分離培養(yǎng)無菌采集病、死雞的川臟、心血等組織，劃線接種于普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板及普通肉湯，37°C培養(yǎng)18?24h,挑取可疑菌落接種在麥康凱瓊脂平板/普通瓊脂上，37°C培養(yǎng)18?24h；再挑取粉紅色單個(gè)菌落再接種在麥康凱瓊脂平板/普通瓊脂上分區(qū)劃線，37°C培養(yǎng)18?24h。連續(xù)純培養(yǎng)3代，得到純培養(yǎng)物。2.2細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察挑取表面光滑，邊緣整齊，灰白色半透明的單個(gè)小菌落劃線接種丁?麥丿隸凱瓊脂平板或伊紅美蘭瓊脂平板，于37°C培養(yǎng)20h,觀察結(jié)果。2.3革蘭氏染色用接種環(huán)挑取一環(huán)牛理鹽水放于玻片上，再挑少量純培養(yǎng)物與玻片上牛理鹽水混合，并均

6、勻涂布玻片上，口然干燥后滴加草酸錢結(jié)晶紫染液，l-3min后水洗；加革蘭氏碘液媒染lmin,水洗；加95%酒精脫色15-30S,水洗;加分紅復(fù)染lmin,水洗,自然干燥后鏡檢。觀察細(xì)菌染色與形態(tài)特征。2.4生化試驗(yàn)挑取麥康凱瓊脂上長出的紅色菌落接種于?；囼?yàn)微量發(fā)酵管中，37°C培養(yǎng)24-48h,并記錄試驗(yàn)結(jié)杲。2.4.1三糖鐵瓊脂（TST）接種用接種針挑取單個(gè)菌落，劃線接種于培養(yǎng)管中（自下到上S型劃線），再將接種針垂直插入半固體培養(yǎng)棊中央，穿刺到培養(yǎng)棊底部，然后沿原穿刺線退出接種針，37°C培養(yǎng)24h,換茬結(jié)果。2.4.2糖（甘、醇）類發(fā)酵試驗(yàn)挑取純培養(yǎng)物接種于微量

7、發(fā)酵管屮，倒置37°C培養(yǎng)24-48h,觀察結(jié)果。若能分解此種糖類產(chǎn)酸，指示劑顯酸性變化，發(fā)酵管種顏色發(fā)牛變化，不分解此種糖類無顏色變化，產(chǎn)氣可使倒置小管內(nèi)產(chǎn)生氣泡。2.4.3口引味試驗(yàn)挑取純培養(yǎng)物接種于蛋口腺水培養(yǎng)棊，37°C培養(yǎng)3-5do先加少量乙醸，要懂事管以萃取和濃縮網(wǎng)喙使其浮于培養(yǎng)基表而，再沿關(guān)閉加入歐-波二氏試劑數(shù)滴，接觸而橙紅色的為陽性反應(yīng)。2.4.4M-R試驗(yàn)挑取純培養(yǎng)物接種于葡萄糖蛋白月東水培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)3-5d,加甲基紅2滴立即觀察結(jié)果，紅色為陽性，黃為陰性。2.4.5V-P試驗(yàn)挑取純培養(yǎng)物接種于葡萄糖蛋H豚水培養(yǎng)基，37°