微生物菌種分離和鑒定技術(shù)

《微生物菌種分離和鑒定技術(shù)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、微生物菌種分離和鑒定技術(shù)微生物純培養(yǎng)分離技術(shù)?獲得純培養(yǎng)物對微生物學(xué)研究至關(guān)重要。?純培養(yǎng)物是指來源于同一單細(xì)胞的細(xì)胞群體。液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基菌懸液連續(xù)稀釋無菌肉膏蛋白胨瓊脂固體土豆片培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)容器中僅含1個菌體(1881年)（明膠固化）(1882年)單個菌體純培養(yǎng)物很多細(xì)菌不能明膠高溫易溶化一直沿用至今在土豆上生長不能37°C培養(yǎng)方法冗長結(jié)果不穩(wěn)定易污染微生物純培養(yǎng)分離技術(shù)?純培養(yǎng)物分離方法?固體培養(yǎng)基分離?涂布平板法?平板劃線法?平板傾注法?稀釋搖管法?液體培養(yǎng)基分離?單細(xì)胞（孢子）分離?選擇培養(yǎng)分離涂布平板法1、

2、少量樣品加到平板中央（1mL）2、玻璃三角涂棒浸入酒精3、沾有酒精的涂棒在火焰上灼燒后使其冷卻4、無菌涂棒將樣品均勻涂布瓊脂培養(yǎng)基表面，適當(dāng)條件下培養(yǎng)平板劃線法?斜線法?曲線法?方格法?放射法?四格法平板劃線法斜線法：用接種環(huán)以無菌操作挑取菌懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3-4條，曲線法：再轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿70°角，并將接種環(huán)上剩余物將挑取有樣品的接種環(huán)燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線劃線。部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線。平

3、板傾注法對起始樣品進行連續(xù)10倍稀釋，將高稀釋倍數(shù)的樣品與冷卻至適當(dāng)溫度的溶化瓊脂培養(yǎng)基倒入無菌平皿后混合均勻，培養(yǎng)后獲得單菌落。培養(yǎng)基表面菌落為圓形，而培養(yǎng)基內(nèi)部菌落呈豆?fàn)罨蛲哥R狀。稀釋搖管法?適合厭氧菌的純培養(yǎng)物分離無菌瓊脂培養(yǎng)基試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右待分離的菌種用這些試管進行梯度稀釋搖勻、冷凝在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱的中間液體培養(yǎng)基分離?不能在固體培養(yǎng)基上生長的微生物仍需要用液體培養(yǎng)基分離來獲得純培養(yǎng)。?稀釋法是液體培養(yǎng)基分離純化常用的方法。?在同一個

4、稀釋度的許多平行試管中，大多數(shù)（一般應(yīng)超過95%）表現(xiàn)為不生長。單細(xì)胞（孢子）分離?單細(xì)胞（或單孢子）分離法是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。?較大的微生物，可采用毛細(xì)管提取單個個體。?個體相對較小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下用毛細(xì)管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個微生物細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。?單細(xì)胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求。單細(xì)胞（孢子）分離選擇培養(yǎng)基分離?傳統(tǒng)選擇性培養(yǎng)基?血平板：適于各類細(xì)菌的生長，一般細(xì)菌檢驗標(biāo)本的分離，都應(yīng)接種此平板。?巧克力血平板：其中含有V和X

5、因子，適于接種疑有嗜血桿菌、奈瑟菌等的標(biāo)本。?中國藍平板或伊紅美藍平板：可抑制革蘭陽性細(xì)菌，有選擇地促進G-菌生長，是較好的弱選擇性培養(yǎng)基。?麥康凱平板：具中等強度選擇性，抑菌力略強，有較少革蘭陰性菌不生長。?SS瓊脂：有較強的抑菌力，用于志賀菌和沙門菌的分離。?堿性瓊脂：用于從糞便中分離霍亂弧菌及其它弧菌。?血液增菌培養(yǎng)基：用于從血液、骨髓中分離常見病原菌。?營養(yǎng)肉湯：用于標(biāo)本及各類細(xì)菌的增菌?新型顯色培養(yǎng)基：?利用微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)顯色的原理來檢測微生物的培養(yǎng)基。微生物快速分離、計數(shù)方法?Petrif

6、ilmPlate(3M)微生物快速分離、計數(shù)方法?3MPetrifilmPlateAerobicCountPlateColiformCountPlateRapidColiformCountPlateE.coli/ColiformCountPlateEnterbacteriaceaeCountPlateYeastandMoldCountPlateStaph.aureusExpressCountPlateEnvironmentalListeriaPlate微生物快速分離、計數(shù)方法?CompactDry(NISSUI)微生物快速分離

7、、計數(shù)方法?CompactDry(NISSUI)微生物菌種鑒定技術(shù)細(xì)菌真核生物古菌?分類等級?界（Domain）?門（Phylum）?綱（Class）?科（Family）?屬（Genus）?種（Species）“種”微生物基本分類類群三界系統(tǒng)發(fā)育樹微生物菌種鑒定技術(shù)“種”的定義：一個種（基因型種）是有相似G+C組成并通過DNA雜交試驗判斷有70%或更大相似性的菌株的集合。表征分類數(shù)值分類系統(tǒng)發(fā)育分類（Phenoticsystem）（NumericalTaxonomy）（Phylogenetic）多相分類根據(jù)相似性或親緣關(guān)系（P

8、olyphasictaxonomy）確定分類類群（分類單元）鑒定確定新的分離物屬于（Identificaiton）已知分類單元的過程。微生物菌種鑒定技術(shù)未知菌種鑒定:它是什么菌？微生物菌種鑒定常規(guī)鑒定目標(biāo)菌檢驗：它是不是某一種菌?控制菌：致病菌：大腸埃希菌（Escherich