微生物菌種分離和鑒定技術(shù)

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1、微生物菌種分離和鑒定技術(shù)微生物純培養(yǎng)分離技術(shù)?獲得純培養(yǎng)物對(duì)微生物學(xué)研究至關(guān)重要。?純培養(yǎng)物是指來(lái)源于同一單細(xì)胞的細(xì)胞群體。液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基菌懸液連續(xù)稀釋無(wú)菌肉膏蛋白胨瓊脂固體土豆片培養(yǎng)基培養(yǎng)基培養(yǎng)容器中僅含1個(gè)菌體(1881年)（明膠固化）(1882年)單個(gè)菌體純培養(yǎng)物很多細(xì)菌不能明膠高溫易溶化一直沿用至今在土豆上生長(zhǎng)不能37°C培養(yǎng)方法冗長(zhǎng)結(jié)果不穩(wěn)定易污染微生物純培養(yǎng)分離技術(shù)?純培養(yǎng)物分離方法?固體培養(yǎng)基分離?涂布平板法?平板劃線(xiàn)法?平板傾注法?稀釋搖管法?液體培養(yǎng)基分離?單細(xì)胞（孢子）分離?選擇培養(yǎng)分離涂布平板法1、

2、少量樣品加到平板中央（1mL）2、玻璃三角涂棒浸入酒精3、沾有酒精的涂棒在火焰上灼燒后使其冷卻4、無(wú)菌涂棒將樣品均勻涂布瓊脂培養(yǎng)基表面，適當(dāng)條件下培養(yǎng)平板劃線(xiàn)法?斜線(xiàn)法?曲線(xiàn)法?方格法?放射法?四格法平板劃線(xiàn)法斜線(xiàn)法：用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取菌懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線(xiàn)3-4條，曲線(xiàn)法：再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿70°角，并將接種環(huán)上剩余物將挑取有樣品的接種環(huán)燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線(xiàn)部分作第二在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)次平行劃線(xiàn)，再用同法通過(guò)第二次平行劃線(xiàn)劃線(xiàn)。部分作第三次平行劃線(xiàn)和通過(guò)第三次平行劃線(xiàn)部分作第四次平行劃線(xiàn)。平

3、板傾注法對(duì)起始樣品進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋?zhuān)瑢⒏呦♂尡稊?shù)的樣品與冷卻至適當(dāng)溫度的溶化瓊脂培養(yǎng)基倒入無(wú)菌平皿后混合均勻，培養(yǎng)后獲得單菌落。培養(yǎng)基表面菌落為圓形，而培養(yǎng)基內(nèi)部菌落呈豆?fàn)罨蛲哥R狀。稀釋搖管法?適合厭氧菌的純培養(yǎng)物分離無(wú)菌瓊脂培養(yǎng)基試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右待分離的菌種用這些試管進(jìn)行梯度稀釋搖勻、冷凝在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱的中間液體培養(yǎng)基分離?不能在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物仍需要用液體培養(yǎng)基分離來(lái)獲得純培養(yǎng)。?稀釋法是液體培養(yǎng)基分離純化常用的方法。?在同一個(gè)

4、稀釋度的許多平行試管中，大多數(shù)（一般應(yīng)超過(guò)95%）表現(xiàn)為不生長(zhǎng)。單細(xì)胞（孢子）分離?單細(xì)胞（或單孢子）分離法是采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個(gè)細(xì)胞或單個(gè)個(gè)體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)。?較大的微生物，可采用毛細(xì)管提取單個(gè)個(gè)體。?個(gè)體相對(duì)較小的微生物，需采用顯微操作儀，在顯微鏡下用毛細(xì)管或顯微針、鉤、環(huán)等挑取單個(gè)微生物細(xì)胞或孢子以獲得純培養(yǎng)。?單細(xì)胞分離法對(duì)操作技術(shù)有比較高的要求。單細(xì)胞（孢子）分離選擇培養(yǎng)基分離?傳統(tǒng)選擇性培養(yǎng)基?血平板：適于各類(lèi)細(xì)菌的生長(zhǎng)，一般細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本的分離，都應(yīng)接種此平板。?巧克力血平板：其中含有V和X

5、因子，適于接種疑有嗜血桿菌、奈瑟菌等的標(biāo)本。?中國(guó)藍(lán)平板或伊紅美藍(lán)平板：可抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌，有選擇地促進(jìn)G-菌生長(zhǎng)，是較好的弱選擇性培養(yǎng)基。?麥康凱平板：具中等強(qiáng)度選擇性，抑菌力略強(qiáng)，有較少革蘭陰性菌不生長(zhǎng)。?SS瓊脂：有較強(qiáng)的抑菌力，用于志賀菌和沙門(mén)菌的分離。?堿性瓊脂：用于從糞便中分離霍亂弧菌及其它弧菌。?血液增菌培養(yǎng)基：用于從血液、骨髓中分離常見(jiàn)病原菌。?營(yíng)養(yǎng)肉湯：用于標(biāo)本及各類(lèi)細(xì)菌的增菌?新型顯色培養(yǎng)基：?利用微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)顯色的原理來(lái)檢測(cè)微生物的培養(yǎng)基。微生物快速分離、計(jì)數(shù)方法?Petrif

6、ilmPlate(3M)微生物快速分離、計(jì)數(shù)方法?3MPetrifilmPlateAerobicCountPlateColiformCountPlateRapidColiformCountPlateE.coli/ColiformCountPlateEnterbacteriaceaeCountPlateYeastandMoldCountPlateStaph.aureusExpressCountPlateEnvironmentalListeriaPlate微生物快速分離、計(jì)數(shù)方法?CompactDry(NISSUI)微生物快速分離

7、、計(jì)數(shù)方法?CompactDry(NISSUI)微生物菌種鑒定技術(shù)細(xì)菌真核生物古菌?分類(lèi)等級(jí)?界（Domain）?門(mén)（Phylum）?綱（Class）?科（Family）?屬（Genus）?種（Species）“種”微生物基本分類(lèi)類(lèi)群三界系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)微生物菌種鑒定技術(shù)“種”的定義：一個(gè)種（基因型種）是有相似G+C組成并通過(guò)DNA雜交試驗(yàn)判斷有70%或更大相似性的菌株的集合。表征分類(lèi)數(shù)值分類(lèi)系統(tǒng)發(fā)育分類(lèi)（Phenoticsystem）（NumericalTaxonomy）（Phylogenetic）多相分類(lèi)根據(jù)相似性或親緣關(guān)系（P

8、olyphasictaxonomy）確定分類(lèi)類(lèi)群（分類(lèi)單元）鑒定確定新的分離物屬于（Identificaiton）已知分類(lèi)單元的過(guò)程。微生物菌種鑒定技術(shù)未知菌種鑒定:它是什么菌？微生物菌種鑒定常規(guī)鑒定目標(biāo)菌檢驗(yàn)：它是不是某一種菌?控制菌：致病菌：大腸埃希菌（Escherich