影響反相高效液相色譜分離的因素.doc

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1、實驗二影響反相高效液相色譜分離的因素一、實驗?zāi)康?.了解高效液相色譜儀器結(jié)構(gòu)；2.熟悉溶質(zhì)結(jié)構(gòu)、溶劑組成和固定相對溶質(zhì)保留值的影響；3.了解影響反相高效液相色譜分離的因素。二、實驗原理1.反相色譜保留機制：疏溶劑理論溶質(zhì)的疏水性、流動相的極性（表面張力）和固定相的烷基鏈長影響溶質(zhì)的保留。2.影響溶質(zhì)分離的因素n：柱長、柱效α：流動相組成與性質(zhì)、固定相性質(zhì)、柱溫等k：流動相組成與性質(zhì)、固定相性質(zhì)、柱溫等三、實驗條件色譜柱：C18（150mm×4.6mm；250mm×4.6mm）流動相：甲醇-水（100，95/5，90/10）；流速：1.0（0.8，0.6，）mL·min-1檢測：U

2、V254nm樣品：苯、萘、蒽四、操作步驟1.流動相組成對分離的影響在C18（150mm×4.6mm）和1.0mL·min-1流速下，依次更換流動相，在每個體系中，均注入5μL苯-甲苯-萘混合樣品，記錄色譜圖，計算對應(yīng)的k、α和R。甲醇-水kαRk1k2k3α2,1α3,2R2,1R3,210095/590/102.流動相流速對分離的影響在C18（150mm×4.6mm）和甲醇-水（90/10）下，依次更換流動相流速，在每個體系中，均注入5μL苯-甲苯-萘混合樣品，記錄色譜圖，計算對應(yīng)的n、k和R。流速（mL·min-1）nkRn1n2n3k1k2k3R2,1R3,21.00.80

3、.63.柱長對分離的影響更換色譜柱，在甲醇-水（90/10，v=1.0mL·min-1）體系中，注入5μL苯-甲苯-萘混合樣品，記錄色譜圖，計算對應(yīng)的k、α和R。柱長nkRn1n2n3k1k2k3R2,1R3,215cm25cm五、數(shù)據(jù)處理1.根據(jù)操作步驟1，繪制lgk～CH3OH％曲線。2.根據(jù)操作步驟1、2和3，說明流動相組成、流速和柱長對k和R的影響。六、思考題1.根據(jù)本實驗的主要結(jié)論，指出下列各組物質(zhì)在反相色譜中的洗脫順序。（1）苯、苯酚和萘；（2）苯酚、鄰甲酚和2,4-二甲酚；（3）正丁醇、仲丁醇和叔丁醇2.在反相柱上欲分離三個相鄰的組分，初試未達到完全分離。如何實現(xiàn)完

4、全分離？