生物技術(shù)制藥-03抗體制藥

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1、生物技術(shù)制藥第四章抗體制藥第四章抗體制藥第一節(jié)概述第二節(jié)單克隆抗體第三節(jié)基因工程抗體第四節(jié)抗體工程第五節(jié)抗體診斷試劑第六節(jié)抗體治療藥物第一階段：用抗原免疫動(dòng)物來(lái)獲得多克隆抗體。1890年Behring和北里柴三郎等發(fā)現(xiàn)了白喉抗毒素，并建立了血清療法，開(kāi)抗體制藥之先河。第二階段：1975年K?hler和Milstein等創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)，制備單克隆抗體，以及各種改進(jìn)型抗體，如人-鼠嵌合抗體。第三階段：1994年Winter以基因工程方法制備抗體為代表，并發(fā)展為抗體工程。1.抗原（antigen，Ag）：指能與淋巴細(xì)胞的抗原識(shí)

2、別受體特異性結(jié)合，具有啟動(dòng)特異性免疫應(yīng)答，而且能與應(yīng)答產(chǎn)物（抗體或致敏淋巴細(xì)胞）在體內(nèi)外發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)。一、免疫學(xué)相關(guān)知識(shí)第一節(jié)概述異物性：是指抗原與所刺激機(jī)體的自身物質(zhì)的差異，這是構(gòu)成抗原免疫原性的首要條件?？乖瓫Q定簇/基（antigendeterminant）——抗原特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)：抗原分子中決定抗原特異性的基本結(jié)構(gòu)或化學(xué)基團(tuán)。抗原分子表面的特殊化學(xué)基團(tuán)，一般由5～15個(gè)氨基酸、5~7個(gè)多糖殘基或核苷酸組成?？乖杵錄Q定簇與相應(yīng)的淋巴細(xì)胞表面的受體結(jié)合而激活淋巴細(xì)胞，引起免疫應(yīng)答；抗原也依靠其決定簇與相應(yīng)抗體

3、及致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合?？乖奶禺愋裕╯pecificity）：是指抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生應(yīng)答及與應(yīng)答產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)均具有專一性。2、抗體（antibody，Ab）是機(jī)體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后產(chǎn)生的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白?？贵w由分化成熟的終末B細(xì)胞，即漿細(xì)胞所合成與分泌。免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）：是指具有抗體活性，或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。主要存在于血液和其它分泌液中，包括抗體和骨髓瘤、巨球蛋白血癥等病人血清中未證實(shí)抗體活性的異常免疫球蛋白。抗體是免疫球蛋白，但免疫球蛋白不一定都是

4、抗體?？贵w是生物學(xué)功能的概念免疫球蛋白是化學(xué)結(jié)構(gòu)的概念A(yù)b=Ig，Ig≠AbIg的基本結(jié)構(gòu)：由四條肽鏈構(gòu)成的單體，即由兩條相同的重鏈（heavychain，H鏈）和兩條相同的輕鏈（lightchain，L鏈）組成。借鏈間二硫鍵而彼此連接在一起，形成Y字形的Ig單體分子。Ig的功能區(qū)：借助鏈內(nèi)二硫鍵的相互作用，將Ig的多肽鏈折疊成幾個(gè)具有特殊生物學(xué)功能的球形結(jié)構(gòu)，一般重鏈有4~5個(gè)、輕鏈有2個(gè)功能區(qū)。包括（1）氨基酸組成和排列比較穩(wěn)定，稱為恒定區(qū)（constantregion，C區(qū)）。（2）氨基酸的種類、排列順序與構(gòu)型的變

5、化很大，故稱可變區(qū)。超變區(qū)是Ig與抗原決定簇發(fā)生特異性結(jié)合的部位，故又稱為互補(bǔ)決定區(qū)（complementarity-determiningregion，CDR）。在V區(qū)中，某些特定區(qū)域的氨基酸殘基顯示出更大的變異性，稱為Ig的超變區(qū)。⑶超變區(qū)（hypervariableregion，HVR）V區(qū)的其他部位稱為骨架區(qū)（frameworkregions，F(xiàn)R），其結(jié)構(gòu)相對(duì)穩(wěn)定。Heavychaing,a,m,d,oreLightchainkorl3.人工制備抗體多克隆抗體（polyclonalantibody，PcAb)：

6、將抗原注入機(jī)體后，刺激B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體是針對(duì)多種抗原決定簇的多種抗體的混合物。特異性不高，有交叉反應(yīng)。單克隆抗體（monoclonalantibody，McAb）：針對(duì)一個(gè)抗原決定簇，由一個(gè)B細(xì)胞分化增殖的子代細(xì)胞克隆而產(chǎn)生的抗體，稱為單克隆抗體。抗體出現(xiàn)的過(guò)程：抗原T細(xì)胞B細(xì)胞漿細(xì)胞抗體毒性基團(tuán)ABCD機(jī)體感染抗感染抗體抗A抗B抗C抗D無(wú)保護(hù)作用中和毒素抗感染作用無(wú)保護(hù)作用吸附感染基團(tuán)單克隆和多克隆抗體的比較保存的穩(wěn)定性良好略差結(jié)合特性與抗原上所有決定簇結(jié)合只與抗原上某一特定決定簇結(jié)合其他血清蛋白存在僅小牛血清少量存在

7、無(wú)關(guān)的Ig10mg/mL原則上不存在0.5~1.0mg/mL抗體含量0.1~1.0mg/mL50~100mg/mL10~50mg/mL特異性和親和性個(gè)體差異，的可重復(fù)性每批均不一樣不變與其他抗原的交叉反應(yīng)有無(wú)Ig的類和亞類所有類和亞類的混合物僅一種亞類McAb培養(yǎng)上清液小鼠腹水性狀PcAb①用于免疫學(xué)檢測(cè)，輔助臨床診斷。②McAb用于親和層析，分離微量可溶性抗原。③標(biāo)記的McAb用于基礎(chǔ)研究，了解細(xì)胞分化等。④制備生物導(dǎo)彈用于腫瘤、移植等的臨床治療。單克隆抗體的用途單克隆抗體的應(yīng)用用于疾病的診斷和治療：如利用單克隆抗體檢

8、測(cè)與某些疾病相關(guān)的抗原，輔助臨床診斷，或用放射性核素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行腫瘤顯像，進(jìn)行免疫鑒定。用于臨床治療，如針對(duì)T淋巴細(xì)胞共有的分化抗原CD3的單克隆抗體，用作免疫抑制劑。單克隆抗體還可作為載體制備導(dǎo)向藥物。但是要解決以下兩個(gè)問(wèn)題：（1）鼠源性單克隆抗體的免疫原性；（2）完整的抗體分子分子量過(guò)大，難以穿透實(shí)體腫瘤組