納豆激酶活性測定.docx

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1、納豆激酶檢測方法目前行業(yè)內(nèi)流行的納豆激酶檢測大致有三種方法，其原理、利弊簡介如下：一、???IU纖維蛋白平板法：以尿激酶為對照，與納豆激酶樣品同時在纖維蛋白平板特定條件下所形成水解圈，測量各自水解圈直徑，通過計算取得相應納豆激酶活力。由于對水解圈直徑的認定的認定存在經(jīng)驗人員視覺差異，導致測定粗放，數(shù)據(jù)波動性強，重復性差，不具權威依據(jù)。二、???FU紫外分光法：納豆激酶與纖維蛋白在一定條件下作用會產(chǎn)生可溶性低分子物質(zhì)，通過紫外分光技術檢測其濃度，通過計算取得相應納豆激酶活力，數(shù)據(jù)穩(wěn)定，重復性強。測定硬件條件苛刻，測定成本高，不具權

2、威性依據(jù)。三、???U中性蛋白酶法：納豆激酶與酪蛋白在一定條件下作用會產(chǎn)生可溶性低分子物質(zhì)，通過普通比色計檢測其濃度，計算取得相應納豆激酶活力，數(shù)據(jù)穩(wěn)定，重復性強。測定簡單，檢測成本低，有國家標準為依據(jù)。1）瓊脂糖一纖維蛋白平板法是，是目前最常用的纖溶酶溶栓活力測定方法，此法的原理是用瓊脂糖作為固體支持，以凝血酶和纖維蛋白原制做人工血栓平板，注入NK，用溶解圈垂直直徑的乘積(mm2)表示纖溶活力，以標準UK或纖溶酶為標準品作標準曲線，計算出NK的活性相當于標準品的單位數(shù)。此法簡便易行，并可同時測定多個樣品，但由于溶解圈面積受恒溫

3、反應時間的影響很大，所以對恒溫時間的控制十分重要，且恒溫時間對粗制酶活性測定的影響比對NK精制產(chǎn)品活性測定的影響大。2）在直徑15mm的硅化試管中依次加入pH值為7.7的咪唑緩沖液、納豆激酶收集液、凝血酶和纖維蛋白原，立即振搖數(shù)秒，使之產(chǎn)生絮狀物，置38℃水浴30min，置冰水中終止反應。用100目尼龍網(wǎng)過濾試管中未溶解的纖維蛋白，濾紙吸干，用蒸餾水漂洗，再用濾紙吸干，放入小試管中，再加3mL濃度為O．2mol/L的NaOH溶液，在沸水中煮15min，冷卻。用分光光度計測定溶液在280nm處的吸光值，并根據(jù)活力計算公式計算纖溶活

4、力。納豆激酶活力=A對照-A樣0.5ml×30min×3×1000ug